荭草素和异荭草素对照品的制备

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1、荭草素和异荭草素对照品的制备【关键词】红蓼；色谱法，薄层；色谱法，高压液相；荭草素；异荭草素；对照品［Abstract］Objective:Toestablishamethodforpreparingthereferencesubstancesoforientinandisorientin.Methods:Orientinandisoorientintheorientalebysolventextraction,silicagelcolumnchromatography,andrecrystallization.T

2、heirstructuresinedbyspectroscopicmethods(MS,1H-and13C-NMR).Thepurityoftheproductseaeuredatography(TLC)andhighpressureliguidchromatography(HPLC)Results:TLCandHPLCanalysisshoethoddevelopedissimpleandeffectiveforproducingproductsorientaleanditspharmaceuticalprepa

3、ration.［Keyorientale;chromatography,thinlayer;chromatography,highpressureliquid;orientin;isoorientin;referencesubstance荭草为蓼科植物荭蓼(PolygonumorientaleL.)的干燥果穂及带叶茎枝，具有清热解毒、祛风除湿、活血消肿的功效，用于治疗风湿性关节炎、冠心病、疝气、疮肿等［1］。前期的研究已从荭草中分离得到黄酮、木脂素、甾体皂苷等多类成分［2~4］。最近对该植物的化学成分和质量研究也证

4、实，以荭草素和异荭草素为主的黄酮苷是其水溶性部位的主要成分［5，6］。在随后的药理筛选实验中，发现荭草水溶性部位有较好的抗心肌缺血和抗缺氧。这些研究结果表明，以荭草素和异荭草素为主的黄酮苷可能是其主要活性成分。付晓春等［7］也在最近的研究中证实荭草素对缺血、缺氧心肌具有明显的保护作用。为控制荭草药材及其制剂质量，在荭草提取工艺研究的基础上，对荭草素和异荭草素的对照品制备方法进行了研究，建立了以萃取、硅胶柱层析、重结晶为手段的能大量制备荭草素和异荭草素的对照品的方法，该法分离所得荭草素和异荭草素的纯度分别为98.03

5、%和98.26%［8］。1仪器与试药VarianINOVA-400核磁共振波谱仪；HPLC-MSD电喷雾质谱仪；岛津高效液相色谱系统，包括LC-10ATvp泵、SPD-10Avp检测器；Rheodyne7725i手动进样阀（美国Rheodyne公司）；L色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公司）。色谱用硅胶（200～300目）及硅胶G预制板由青岛海洋化工厂生产，色谱用聚酰胺由浙江黄岩化工厂生产。乙腈(色谱纯)、甲醇（色谱纯）、磷酸（分析纯），水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。实验样品采自贵州省贵阳市鹿冲关，由贵阳医学院药学

6、院生药学教研室龙庆德副教授鉴定为PolygonumorientaleL。2方法与结果2.1药材的提取与分离取荭草药材15kg，用10倍量水煎煮3次，每次1h，滤过，滤液浓缩至15kg，加乙醇30kg，搅拌均匀，静置12h，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至15kg，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，减压回收正丁醇，得到富集黄酮类化合物浸膏120g。2.2化合物的分离120g浸膏用50%乙醇500ml溶解，加200g硅胶(200~300目)搅拌，自然晾干，研细，过80目筛，备用；取硅

7、胶(200~300目)2400g，用水饱和醋酸乙酯湿法装柱；将拌样硅胶上于装好的硅胶柱表面，用水饱和醋酸乙酯∶冰乙酸(10000∶1)洗脱，分段收集，各段在硅胶G预制板上点样，用醋酸乙酯-甲酸-水(10∶0.5∶0.5)展开，喷以10%硫酸乙醇试液，加热显色，检查Rf=0.5（荭草素）和Rf=0.3（异荭草素）的2个黄色主斑点部分，分别回收溶剂。荭草素部分的残留物用100ml甲醇超声溶解过滤，滤出的沉淀物用适量50%乙醇加热回流溶解放置，结晶完全后，滤出结晶，再以适量甲醇加热回流溶解，加入等体积醋酸乙酯混匀，放置结

8、晶，得荭草素的黄色粉末1.26g；异荭草素部分的残留物用100ml甲醇超声溶解过滤，滤出的沉淀物用适量甲醇加热回流溶解放置，结晶完全后，滤出结晶，再以适量甲醇加热回流溶解，放置重结晶，得黄色颗粒结晶2.47g。2.3结构确定　　2.3.1荭草素淡黄色粉末，盐酸镁粉反应阳性，mp256～258℃。UV（MeOH）λmax：210、256.5、269、348nm