生物学鉴定法鉴定马铃薯纺锤块茎类病毒技术的应用研究

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1、生物学鉴定法鉴定马铃薯纺锤块茎类病毒技术的应用研究【】本文以来自于黑龙江省哈尔滨、绥化、齐齐哈尔、嫩江、牡丹江、扎兰屯、牙克石、克山、依安、讷河马铃薯种植区的品种东农303、克新1号、克新2号、克新3号、克新4号、米拉、早大白、花525、克新18号、克新12号为试验材料，用生物学鉴定法（指示植物鉴定法）在防虫温室中通过汁液摩擦的方法在25种指示植物上接种上述十个品种的汁液。通过症状观察，主要通过鲁特格尔斯番茄、直房从至番茄、天蓬子、莨菪（scoroliosinensis）、野生马铃薯（solanumBertalthii）等特定鉴定寄主上的症状来判断哪个植株中含有马铃薯纺

2、锤块茎类病毒(PSTVd)，哪个植株中不含有马铃薯纺锤块茎类病毒。结果表明在黑龙江省存在马铃薯类病毒。　　【关键词】马铃薯纺锤块茎类病毒;生物学鉴定法　　　　0.前言　　马铃薯种薯退化的主要原因是感染病毒病和类病毒，病毒是造成马铃薯品质下降和产量降低的主要原因。　　马铃薯纺锤块茎类病毒是世界上一类检疫病害，对于严格的植物检疫而言，类病毒是相当重要的，它也是育种和遗传资源保存中的一种棘手的病原。大田中，PSTVd可以造成严重减产，在中国，一些感病的地方品种的减产幅度高达80%,PSTVd和其他病毒复合侵染可能引起更严重的病害。　　为了摸清马铃薯纺锤块茎类病毒在我省发生分布

3、情况，我们于2008年开展了本项目的研究工作。　　1.材料与方法　　1.1材料　　用来实验的品种—米拉、早大白、花525、克851、克新12号、东农303、克新1号、克新2号、克新3号、克新4号。上述品种分别来自于哈尔滨、齐齐哈尔、嫩江、扎兰屯、牙克石、绥化、依安、讷河、克山马铃薯种植区。　　用于进行生物学鉴定所需设备：防虫温室、铁架子、花盆（大号、中号、小号）、黑土（必须用筛子筛才能用）、马粪（必须发酵后用筛子筛完后才能用）、大铁桶（储存水）、大衣盆、刷子、洗衣粉（这三样用来清洗花盆，花盆每年用前必须刷干净）。筛子、铁锹、筐、推车、喷壶、塑料管、遮阳X、尿素（用来促进

4、植珠生长）、金钢砂、研钵。　　用来进行生物学鉴定的指示植物，植物种类：黄苗榆烟、白肋烟、大千豆、心叶烟、伯尼烟、香料烟、三生烟、黄花烟、紫花球果蔓陀罗、白花剌果蔓陀罗、毛蔓陀罗、洋球浆、假酸浆、黄姑娘、小圆椒、指尖椒、千日红、Saco、S41956、直房丛生番茄、鲁特格尔斯番茄、天蓬子、莨菪、黑龙葵、黄龙葵、野生马铃薯（sdanam.Berthaulthii）。　　1.2方法　　1.2.1指示植物种子的培育　　将以上列举的指示植物播种于花盆中，花盆中事先浇透水，播完种子后上面覆0.5cm厚土。　　1.2.2指示植物的移栽　　在指示植物长至2-4叶子并有较强的根系时可将植

5、珠带土定植到另一花盆中。　　1.2.3指示植物摆组接种鉴定　　将上述提到的指示植物摆组，每组中包括上述提到的每种指示植物，每组中系统侵染的植株摆一盆，局部侵染的植珠摆两盆。接种前，将接种叶掐尖，每个指示植物掐4-6片叶子，然后三天后调查马铃薯纺锤块茎类病毒侵染各种指示植物的情况，仔细记录各个指示植物的症状表现。　　从7月1日至7月23日前往哈尔滨、齐齐哈尔、嫩江、扎兰屯、牙克石、绥化、依安、讷河、克山马铃薯种植区，采取有病植珠叶片，每个种植区按照“X”路线，采取5个点采样法，每点采20个样品，每个种植区共采100个样品。每份样品剪碎后放入研钵中，加入1：10倍的磷酸缓冲

6、液充分研碎成糊状。接种前，将接种叶掐尖，每个指示植物掐4-6片叶子，然后在叶片上用喷粉器喷上金钢砂，用一个手指蘸病毒汁液在接种叶上轻轻主摩擦，再用清水冲洗接种叶上的杂物（多余金刚砂和植物组织）。三天后调查马铃薯纺锤块茎类病毒侵染各种指示植物的情况，仔细记录各个指示植物的症状表现。　　当从种植区采取的植珠叶片的汁液接种在鲁特格尔期番茄上在室温25-37℃和光照16小时强光条件下，接种半月后蕃茄中，上部叶片变窄小和扭曲时，植珠中含有马铃薯纺锤块茎类病毒病，无症状的或其它症状的不能证明该植珠中含有马铃薯纺锤块茎类病毒。　　当从种植区采取的植珠叶片的汁液接种在莨菪(scorol

7、iosinensis)上，在室温20-22℃和弱光条件下，接种3-5天或10-15天接种叶片沿脉，出现褐小坏死斑点时，该植珠含有马铃薯纺锤块茎类病毒，无症状的或其它症状的不能证明该植珠中含有马铃薯纺锤块茎类病毒。当从种植区采取的植珠叶片的汁液接种在天蓬子上，接种5-7天，温度在20℃弱光条件下，接种叶片沿脉出现褐色坏死点时，该植珠含有马铃薯纺锤块茎内病毒，无症状的或其它症状的不能证明该植珠中含有马铃薯纺锤块茎类病毒。　　2.结果与分析　　用生物学鉴定法分析黑龙江省马铃薯纺锤块茎类病毒的发生情况。　　将2008年通过生物学鉴定法，鉴定黑龙江