实验六 胶体金免疫层析技术

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1、胶体金试纸条诊断技术肖书奇动物医学院预防兽医学系电话：18700928448E-mail:shqxiaojd@hotmail.com实验目的掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方法及结果的判定简介胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。胶体金（Colloidalgold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠）的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳

2、定的胶体状态，故称胶体金。简介质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。胶体金的质量判定标准简介胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合。胶体金标记技术（Immunogoldlabelingtechnique）是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。简介胶体金试纸条诊断技术的原理以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。最常用的是双

3、抗夹心法检测抗原胶体金试纸条示意图检测线质检线吸收垫样品垫硝酸纤维素膜连接垫（胶体金垫）背衬（底板）测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经C处时使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。测定若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体捕获，在膜上显出红色反应线条（T）。测定过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠IgG结合（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠IgG），而显出红色质控线条（R）。测定阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。测定胶体金快速诊断技术的特点简捷快速：操作简单，一般只要5

4、-10min就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR需要时间更长。结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。胶体金快速诊断技术的应用H5亚型AIV尿囊液阳性结果阴性对照阴性对照H5ＡIV细胞毒阳性结果瘦肉精试纸条检测的原理？早孕试纸条检测的原理？课后思考