y透明剂在临床病理制片中的应用体会

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1、Y透明剂在临床病理制片中的应用体会孙帅1赖洵2（通讯作者）（1云南省第一人民医院心内科云南昆明650032）（2云南省第一人民医院血液内科云南昆明650032）【摘要】目的：评价丫透明剂在临床病理组织切片制作中的应用。方法：用丫透明剂和二甲苯分别制作组织切片、经HE、特殊染色及免疫组化染色，观察比较实验效果。结果：用Y透明剂制作的组织切片效果优于二甲苯。结论：Y透明剂可以完全替代二甲苯。【关键词】丫透明剂二甲苯毒性病理制片【中图分类号】R319【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）07

2、-0014-02病理技术是病理学诊断不可分割的一部分，制片质量的好坏很大程度上影响病理医牛.做出正确的病理诊断。通常一张病理制片需要经过组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片烤片、脱蜡、染液等十几歩才能完成，其中切片脱水透明是非常重要的一步。HE染色后，要彻底脱水透明，才能进行树胶封盖，成为永久标木。如果脱水透明不彻底，封片后呈白色雾状，镜下模糊不清，过一段时间染片就褪色。脱水可使用无水乙醇，而透明液多釆用二甲苯。二甲苯只有极强的挥发性，易通过呼吸道吸入或皮肤黏膜接触进入人体，导致慢性中毒症状，卫生

3、部将二甲苯中毒定为百种职业病中的一种［1］。因此，寻找一种质优且无毒的二甲苯替代品成为目前病理实验室不断探索的方向［2-4］。Y透明剂是一种新型无毒透明剂。自2010年至今，昆明医学院第一附属医院、云南省第一人民医院、云南妇幼保健医院等多家医疗单位均选用丫透明剂替代二甲苯用于病理制片，取得了良好效果，报告如下。1材料与方法1.1材料各院送检的病理组织标木，包括肝、网膜、脾、肺、肾、皮肤、子宫刮宫物、胎盘、脾或血栓物等组织，标木固定于10%中性福尔马林液中，取材大小为2cm×1.5cm&time

4、s;0.3cm，选取丫透明剂和二甲苯制片各2000张。1.2试剂丫透明剂：由昆明籁盾科技公司提供，是一种生物提取油混合物。洒精：分析纯，天津市天达浄化材料精细化工厂。石蜡：上海华铃康复器械厂。二甲苯：分析纯，成都化学试剂厂。1.3仪器设备温箱：BHTARTHURH.THOMASCO.U.S.A。摊烤片机：YT-6B型，湖北孝感亚光医用电子技术研究所。切片机：德国LeicaRM2135。1.4操作方法组织固定、脱水、透明及浸蜡：首先用同一次配制的10%中性甲酸及Carnoy固定液固定6〜8h。固定结束后，流

5、水冲洗2h。其次常规梯度洒精脱水，洒精浓度为75%、80%、95%、100%。完成组织脱水后，二甲苯组用分析纯瓶装二甲苯进行透明，丫透明剂组用Y透明剂透明。二甲苯和丫透明剂都用两缸透明，以保持透明剂的纯度和浓度。最后使用60°C温箱浸蜡，把预先熔化的石蜡分两缸浸蜡。包埋、切片、脱蜡、贴片及烤片：使用与浸蜡相同的石蜡，包埋机包埋。轮转式切片机连续切片，切片厚度为5μm。二甲苯组用二甲苯脱蜡，Y透明剂组用Y透明剂脱蜡。载片涂抹贴片剂后贴片。烤片机烤片，温度70°C，吋间lh。1.5染色方法染色方法分两组

6、进行，染色步骤中包括常用的HE染色，特殊染色法有胶原纤维的万吉森染色(VG)法［5］，弹性纤维的醛复红染色法［6］,Gordon-Sweet染色法［7】,酸性粘多糖的阿利辛蓝染色［8】，糖原的PAS染色法［9】，基底膜的PASM染色法［10］，乙型肝炎表面抗原的维多利亚兰(Victoriablue)染色［11］，免疫组织化学法中的主要抗体有癌胚抗原(CEA)抗体和高分子通量细胞角蛋白(CKH)抗体［12］。在探索性研究中我们对每一个切片用HE染色法操作做一般性评估，在大规模研究中我们应用病理科常规的组织H

7、E染色、特殊染色及免疫组化方法评估。2结果2.1评估石蜡块系统地评价石蜡块及制成切片后的质量，如果出现干燥、破碎或异味都要做出详细说明并登记，间瞞6个月到2年的时间里长期维持对石蜡块的评估。结果使用丫透明剂制做出来的组织石蜡块透明效果好，组织硬度适中，腊块容易切出3〜4um的连续切片，切片脱蜡彻底。不论是富含脂肪还是富含血管的组织切片效果均优于二甲苯，且无刺鼻性气味，在长期储存下石蜡块质量保存完好。2.2评估染色部分评估人员采取双盲的方法对所有的切片进行编号和评价，应用不同的标准系统地登记染色切片，切片质

8、量的评价标准是切片中是否奋裂缝及破碎的存在，对组织和细胞形态的评价是检查细胞右无皱缩，细胞纹理、细胞质及染色质结构的清晰度。结果Y透明剂组HE染色细胞核呈蓝色，细胞质、纤维和肌组织等呈深浅不同的红色，核浆染色分明，对比清晰，透明度好，和常规制片没有什么明显差异，达到优质HE染色切片要求。特染及免疫组化技术也均能清晰的显示或表达病变的阳性结果（图1）。实验中丫透明剂对组织切片制作程序中任何操作步骤都没有影响，在病理室常规操作情况