用midi macs方法从白血病患者分选cd34＋-cd123＋细胞

《用midi macs方法从白血病患者分选cd34＋-cd123＋细胞》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、用MidiMACS方法从白血病患者分选CD34＋/CD123＋细胞：王光平，曹星玉，信红亚，李群，齐振华,陈方平【摘要】本研究的目的是应用MidiMACS方法从急性髓系白血病（AML）患者骨髓细胞分选CD34+/CD123+细胞。首先，用淋巴细胞分离液从AML患者骨髓细胞分离单个核细胞（BMMNC），然后再通过MidiMACS方法相继分选出CD34＋细胞，以及从CD34+细胞中分选出CD123＋细胞并通过流式细胞术分析分选后细胞的富集度和回收率。结果显示：经过第一次分选后，CD34+细胞的富集度高达98.73%，平均为95.6%，其回收率最

2、高可达到84.6%，平均为51%；第二次分选后，CD34+/CD123+细胞的富集度高达99.23%，平均约为83%；相对于分选前BMMNC而言，CD34+/CD123+细胞的回收率为34%，但相对于第一次分选后的CD34+细胞而言，其回收率为56%。结论：MidiMACS方法可用于AML患者骨髓CD34+/CD123+细胞的分选，分选后细胞的富集度和回收率与文献报道的通过FACS方法所获得的结果相类似。【关键词】CD34+/CD123+细胞；分选方法；MidiMACS；白血病　　CD34+/CD123+CellSortingfromthe

3、PatientsiabyMidiMACSMethod　　AbstractTheaimofthisstudythebonemarroyeloidleukemia(AML)byMidiMACSmethod.Firstly,thebonemarroononuclearcells(BMMNC)thepatientsethodfollothefractionofCD34+cells.TheenrichmentandrecoveryofCD34+andCD34+/CD123+cellsentofCD34+cellsententofCD34+/CD123

4、+cellsentedthatthemethodofMidiMACSsortingcanbeappliedtosortCD34+/CD123+cellsfromthebonemarroilarenrichmentandrecoveryofthesortedcellsethodofFACS.　　Keyethod；MidiMACS;leukemia　　白血病，尤其是急性髓系白血病（AML），是起源于少量的干/祖细胞疾病。这些干/祖细胞是一些发生了突变的造血干/祖细胞，即白血病干/祖细胞（LSPC）［1，2］。除了具有正常造血干细胞（HSC）的自

5、我更新和某些细胞表型如CD34+、CD38-、CD71-以及HLA-DR-等特征外，LSPC还具有自己特有的表型，即CD90-、CD117-、CD123+［3-5］。因此，依据这些特异性的表型，可对LSPC进行分离和纯化。在分离正常造血干/祖细胞（HSPC）中，MACS分选方法得到了广泛的应用。但是，采用该方法分选LSPC的报道却很少。为此，本研究应用MidiMACS分选方法对AML患者的CD34+/CD123+双阳性细胞进行了分选。　　材料和方法　　单个核细胞的分离　　无菌抽取AML患者（2例M2a，1例M1）3-6ml骨髓，放于加有肝素

6、的15ml试管内，用等体积无钙离子的PBS缓冲液（Gibco产品）洗涤和稀释后，慢慢加到含有淋巴细胞分离液（购于北京鼎国公司）的试管内，于室温350×g离心20分钟。离心后，小心除去上清液并吸取白细胞层于另一新试管内，首先用5ml无钙离子PBS+2mmol/LEDTA缓冲液（以下简称为缓冲液1）洗涤细胞，于130×g离心5分钟。然后，用5ml缓冲液1重悬细胞并于90×g离心2次，每次5分钟。离心后，再用2ml的缓冲液1重悬细胞并计数细胞。经60×g离心5分钟后，按每108个细胞用300μl的比例加入无钙离子的PBS+2mmol/LEDTA+

7、0.5%FCS缓冲液（以下简称为缓冲液2）重悬细胞。　　CD34+细胞的分选　　首先用CD34多分选试剂盒（MiltenyiBiotec公司产品）分选CD34+细胞，亦即取已混匀好的封闭试剂100μl加入到300μl的上述细胞悬液中,混匀后置室温5分钟。然后，每108个细胞加入100μl的CD34磁珠（小于108个细胞，仍加入100μl的CD34磁珠），轻轻混匀后，于4℃作用30分钟。用5ml缓冲液2重悬细胞，于90×g离心2×5分钟后，再用5ml缓冲液2重悬细胞。将Midi分选柱子（MiltenyiBiotec公司产品）安装在分选器上，过

8、柱分选之前，先用3ml缓冲液2过柱以润湿柱子。然后，将上述已标记好的细胞悬液加到柱子上并经4×5ml缓冲液2过柱洗涤。洗涤后，将分选柱子从分选器上撤离下来并置于另一新的15ml试