液相色谱实用技术_色谱柱的使用及保养

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1、液相色谱实用技术色谱柱的使用及保养良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽色谱柱的使用及操作流动相的转换特别是GPC柱流速(压力)的变化幅度温度的变化幅度专用色谱柱∶样品及溶剂的要求色谱柱的保养（一）样品方面除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用色谱柱的保养（二）流动相方面除去微粒纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液

2、（盐）的浓度溶剂：色谱纯，并与填料相匹配溶剂中的杂质含量流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的比例在线的保护装置给色谱柱提供物理的保护除去样品及流动相中的颗粒给色谱柱提供化学的保护防止分析柱被化学污染装置在线过滤器自装填料保护柱预装保护柱在线过滤器In-LineFilter，部件号WAT084560防止颗粒在色谱柱头累积优点：基本不影响柱效在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸分析）可更换的消耗品更换滤芯，部件号WAT005139(5/pkgs)更换垫圈，部件号WAT084567(10/pkgs)保护柱可避免化学污染。多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效，特别是

3、在用微柱时保护柱的种类普通自装填料的保护柱Waters的部件号，WAT084550，用户自装填料影响柱效同装填技术有关，柱效降低较大Guard-Pak预装保护柱Waters的部件号，WAT088141有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容积较小，也引起柱效降低可换芯式保护柱新型的保护柱—SentryGuard适应的用户类型非常脏,非常复杂的样品本底生化样品,溶液环境样品食品不想作太多的固相萃取不想降低柱效新型的保护柱—SentryGuardSentryGuard的特点特点高质量,高效填料-不损失柱效增加分析柱效-增加适应范围20mm柱长-脏样品载荷能

4、力大，能延长保护柱寿命手可拧紧接头，安装时不需要工具通用柱套-适用于所有的HPLC柱(3.9及4.6内径)整体式（对Waters柱）-使用方便，容易各种不同填料配合Waters柱SentryGuard的规格产品描述3.920mm柱长适应任何色谱柱，不需工具即可安装及更换可换柱芯式设计，提供各种填料:BondaPak:C18,phenyl,CN,NH2,SilicaNova-Pak:C18,C8,phenyl,CN,SilicaResolve:C18,C8,SilicaDelta-Pak:C18,C4Symmetry:C18,C8色谱柱的清洗对所做的样

5、品要有充分的了解用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗硅胶柱的一般方法先用甲醇洗去极性杂质用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化键合相柱(烷基)的一般方法20倍柱体积的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗色谱柱的存放存放前的处理除去杂质、盐合适的存放溶剂避免色谱柱床的干枯避免机械震动防止细菌生长注意存放的温度色谱柱常见毛病柱压过高多少才算高?不同色谱柱有差异不同系统有差异不同溶剂有差异柱效低重复性差不出峰，回收率低柱压过高为什么柱压会过高微粒堵塞样品流动相密封垫柱床膨胀不可逆吸附细菌生长柱效低为什么柱效低色谱柱被污染过滤片部分堵塞样品、流动相或密封

6、垫的细小颗粒造成的堵塞色谱柱内的死体积流动相pH值及组成不合适造成固定相流失流速急剧变化造成固定相物理损坏机械震动造成固定相产生裂缝柱床收缩或干枯重复性差、回收率低实验的重复性差色谱柱被污染流动相pH值及组成不合适造成键合相流失样品溶剂不同或样品本身不稳定回收率低，不出峰“不可逆”吸附固定相过强或流动相过弱非特异性吸附色谱柱以外的因素（一）“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！仪器问题：连接不好造成死体积进样器检测器管路，连接口保护柱在线过滤器堵塞流动相问题：色谱柱未平衡好进样量太大色谱柱与仪器的联接除HP外，不同公司产品，其接头不同。处理不当时，会造成：色

7、谱峰展宽（死体积）使柱效下降、或渗漏解决办法：自制相应的转换接头使用“通用”型接头（锥箍及螺母）这种锥箍在不锈钢管上是活动的，因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。从PhaseSeparations公司能得到一些PEEK工程塑料的接头，可用在所有类型的色谱柱上的。Waters色谱柱的联接Waters及PhaseSeparations锥箍及螺母相同，但锥箍前露出不锈钢管长度不同，其长度被称为：“stop-depth”Waters除Spherisorb以外的各种品牌的色谱柱用的是“Waters”标准，其stop-depth的长度为0.130英寸Spheriso

8、rb品牌的色谱柱及PhaseSeparations公司其他品牌色谱柱用的是“Pa