论文答辩模板ppt课件

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1、动物科技学院硕士研究生毕业论文答辩布鲁氏菌019株弱化与基因缺失株构建及初步免疫评价姓名：指导老师：研究背景研究目的试验研究全文结论1234汇报内容论文创新5文章发表6一、研究背景布鲁氏菌病(Brucellosis)是一种人畜共患传染病，在全世界范围内广泛分布，在我国也有大量的动物发生感染，新疆是我国的高发地区。动物感染布鲁氏菌后主要表现为波浪热，关节肿大及生殖系统的疾病。目前布鲁氏菌病的预防控制主要通过疫苗接种，我国主要采用弱毒活疫苗有M5-90、S2等。疫苗株的缺陷：毒力仍然较强；存在返强的潜

2、在威胁；不能有效区分疫苗免疫和自然感染。一、研究背景pgm基因编码的磷酸葡萄糖变位酶，参与布鲁氏菌脂多糖O链装配过程，该基因的缺失会影响光滑型布鲁氏菌LPS的合成。由于LPS是介导宿主先天性免疫反应的重要抗原，pgm基因是布鲁氏菌重要的毒力基因。一、研究背景目前，国内外已有布鲁氏菌pgm基因突变或缺失的报道：Juan等将布鲁氏菌S19进行了pgm基因敲除，获得了布鲁氏菌pgm基因缺失株，动物试验结果表明：pgm基因缺失株不能合成LPS，同时也检测不到O链抗体，和亲本株S19有相似的免疫保护性。一、

3、研究背景布鲁氏菌019株是1980年在新疆紫泥泉种羊场被发现并分离；较其他野毒株，毒力较弱，但依然可诱发动物的病理损伤，主要引起公羊的附睾炎等症状。布鲁氏菌氢氧化铝佐剂灭活苗接种羊群后，保护率可达75%。一、研究背景通过物理和化学的方法对布鲁氏菌019株进行诱导突变，分析生长状况及毒力的变化。针对布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶基因（pgm）定向构建布鲁氏菌019的pgm基因缺失株，并对其毒力及免疫效果进行评价；探讨布鲁氏菌019株致弱后作为疫苗株的潜力。二、研究目的三、实验研究实验一布鲁氏菌019株弱化

4、与毒力评价实验二布鲁氏菌019Δpgm基因缺失株构建实验三布鲁氏菌019Δpgm毒力及初步免疫评价实验一布鲁氏菌019株弱化与毒力评价0.1%、0.05%吖啶橙实验方案连续转接50次0.1%、0.05%苯酚紫外线照射5min、2min生长曲线小鼠脾脏指数脾脏CFU计数评价毒力变化布鲁氏菌019株自身生长能力疫苗应用前景评价结果与分析1、生长曲线的绘制结果显示：25h后进入对数生长期，细菌随时间变化快速增长，61h后菌数趋于稳定。2、代时比较组别019紫线照射(2min)紫线照(5min)AO(0.

5、1g/L)AO(0.05g/L)PhOH(0.1g/L)PhOH(0.05g/L)代时（h）0.861.5451.621.891.691.031.01结果显示：各处理组细菌代时与亲本019株相比较均有不同程度的增加。结果与分析3、小鼠脾脏指数变化菌株脾脏指数01910.43±1.12a紫外线照射（2min）8.81±1.28b紫外线照射(5min)8.38±1.30bAO（0.1g/L）9.74±1.08aAO（0.05g/L）10.13±1.47aPhOH（0.1g/L）8.72±0.43bPh

6、OH（0.05g/L）9.62±1.74abM5-908.24±0.93bcPBS5.56±0.34c结果显示：1108菌/只腹腔接种小鼠后，苯酚处理组和紫外照射处理组小鼠脾指数明显低于亲本株019株（P<0.05），吖啶橙处理组与亲本株无明显差异（P>0.05）。结果与分析组别LogCFU0198.57±0.35a紫外线照射（2min）8.51±0.87a紫外线照射(5min)7.92±0.43bAO（0.1g/L）7.96±0.56bAO（0.05g/L）8.36±0.31aPhOH（0.1

7、g/L）8.30±0.52abPhOH（0.05g/L）8.36±0.32aM5-906.79±0.25c4、小鼠脾脏细菌计数结果显示：各处理组布鲁氏菌在小鼠脾脏内的细菌均有不同程度的减少，但均显著高于疫苗株M5-90组。经0.1g/L吖啶橙处理和5min紫外线处理组小鼠脾脏CFU与亲本株019相比明显减少，差异显著（P<0.05）。结果与分析对布鲁氏菌019株进行紫外照射或吖啶橙、苯酚诱导处理后，毒力发生了一定变化。各处理组生长特性也发生了不同程度的变异，说明短暂的诱导不仅可以影响其毒力的变化也

8、影响了其自身生存能力。讨论实验二布鲁氏菌019Δpgm基因缺失株构建根据GeneBank上发表的绵羊附睾布鲁氏菌019基因组序列设计引物，扩增pgm基因的上下游同源臂上下游同源臂融合后连接T载体，测序正确后与pGEM-7zf+载体连接基因突变株传代10代进行遗传稳定根据发表的枯草芽孢杆菌SacB基因序列设计引物，扩增目的基因自杀质粒电转化至布鲁氏菌019株中，分别经过Amp抗性筛选和蔗糖敏感性筛选，获得同源重组交换子构建布鲁氏菌同源重组自杀质粒pGEM-7zf+Δpgm-sacBS