家蚕分子生物学研究进展

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1、家蚕分子生物学研宄进展陈克平，徐家萍，姚勤(江苏大学生命科学研究院，中国江苏镇江212013)摘要:近年来，应用RtlPD技术，通过构建近等基因系的方法，已筛选出家蚕性别、杭性等连锁的分子标记.tl本己成功地构建了家蚕28个连锁群的RtlPD分子连锁图，并有7个连锁群和经典的遗传图相对应.我国也公布丫RtlPD和AFLP分子连锁图，由于密度不够出现28个以上的连锁群;家蚕生物反应器研宂和开发己近20年历史，表达了数百种外源基因，由于表达量不岛及产物分离纯化难度和成本问题，至今未能进入产业化。家蚕转基因有过比较好的尝试，改进转基

2、因技术提高外源基因的整合率是今后主攻方向.关键词:家蚕;分子标记;连锁图;生物反应器;转基因蚕中图分类号:096文献粘识码:A文章编号:1007847(2003)03-0208-06家蚕作为遗传材料的研究历来与果蝇并驾齐E农业动物屮处于领先地位.在孟德尔定律被确认后第二年，CotagneG于1902年发表了《家蚕遗传的实验研究》一文，可谓是家蚕实传学的先驱;1919年田中义磨所著的《蚕的遗传学讲话》一书，奠定了家蚕遗传学基础.经过80余年中、外蚕业学者的努力，家蚕已记载性状440多个，其巾200多个性状基因己定位.到1992年

3、为止，家蚕28条染色体上已找到了标记基因，绘出了经典的连锁遗传图.1990年，Goldsmith等首先提出了国际蚕分子育种计划(InternationalSilkwormProje)川，从而引导家蚕分子生物学取得了长足的进展.近年来在家蚕分子标记、起源与进化、转基因蚕、生物反应器、基因组计划等领域成绩斐然，使古老的蚕丝学研究进入一个崭新的吋代。1.家蚕分子称记的类型及连锁图1.1家蚕分子标记1.1.1RFLP①(RestrictionFragmentLengthPollmorphism)标记RFLP即限制性片段长度多态性，这是

4、家蚕基因组的研究中首先采用的分子标记ikuchi等用RFLP技术分析Y家蚕丝素基因的上游调控区，发现丝素重链基因与丝素轻链基因的上游调控区有很大的相似性.Pinyar。等［z)用RFLP技术将家蚕滞育激素DH基因定位于第22染色体连锁群上.廖顺尧等［s〕用29种限制性A切酶对35个不同品种家蚕卵线粒体DNA进行酶切分析，发现一化、二化品种与多化品种的HaeII贩切图谱有差异，另外，一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mtDNA在BglI和PatI酶切下，也呈现不同的酶切带型，绘制了较精确的家蚕mtDNA限制性内切酶酶切图谱.1.1.

5、2RAPD©(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)fe•记RAPD标记，即随机扩增多态性1A分子标记，这是继RFLP以后在家蚕上应用最多的一种标记.Ah。等［4-A〕对家蚕W染色体和。手工，{nsc}2连锁的分子标记进行了研究，获得了分子标记并定位.林健荣等［9)以家蚕华1,S伴性品种及其杂交后代为材料，筛选到家蚕胚胎温敏基因2个特异性DNA多态片段一个只出现在温敏性赤蚁蚕品种中.另一个出现在非温敏黑蚁蚕品种中，扩增条带约1350by，命名为OPT02,350,经共分离的检测分析，与黑蚁非温敏性状有较紧

6、密的连锁关系.李木旺、陈克平等［ion对家蚕抗浓核病中国镇江株(nsc}Z)基因RAPD标记进行了研究，通过150个引物的筛选，找到OPI}07,QOo与抗浓核病屮国镇江株(n.sc}Z)基因连锁，通过Fz代验证标记的可靠性.汪琳、周泽扬［川等对家蚕龙角突变基因进行分子标记筛选，初步获得OPh110,00的龙角基因K的特异标记，并成功克隆，证明OPh110,00是可供家蚕育种利用的分子标记.陈克平、鲁成{iz}等进行了家蚕耐氟性RAPD分子标记的研究，获得了与家蚕耐氟性有关的两个分子标记OPB-08A3和OPB-109-，并且

7、在回交世代中进行检测，验证了分子标记的可靠性.1.2连锁图谱1.2.1RFLP图谱Goldsmith等［‘3】采用两个“近交系’，蚕品种P50,C108的原种、F-F,回交或Fz个体蚕为材料，分别由这些个体蚕的早期滤泡细胞mRNA合成cDNA，构建以琢II为载体的cDNA文库.再用卵壳蛋白、丝心蛋白、rDNABmAntp等已克隆的21个基因作探针，检测EcoR工、HandI工、等6个限制性酶组合的个体(DNA文序，进行South〜杂交，筛选得到60个蚕的DNA标记.其中13个记是己知的分布在10个基因座位上且己被克隆的基因，9

8、个标记是低拷贝反转录转座子，巧个序列标记为己知的表达序列，36个标记为来自cDNA文库的未知表达序列，利用Mapmark二软件分析，60个标记中52个标记分别分布在16个连锁群，还有8个标记，若认为其各代表一个连锁群，则此60个标记可能代表了蚕的28个连锁群中的24个，连锁图