药物体外抗菌试验 第十九章

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1、第十九章药物的体外抗菌试验教学要求.（一）掌握常用的体外抑菌试验（连续稀释法、琼脂扩散法）。.（二）熟悉杀菌试验（最低杀菌浓度、最低致死浓度的含义及测定的方法，活菌计数法，石碳酸系数测定法）；联合抗菌试验（纸条试验、梯度平板纸条试验、棋盘格法），协同、拮抗、无关、累加的概念。.（三）了解体外抗菌试验的影响因素。第一节常用的体外抑菌试验一、药物的体外抗菌试验.又称药敏试验，主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性。.最低抑菌浓度（MIC）：指药物完全抑制某种微生物生长的最低浓度。.优点：方法简便、需时短、用药量少，不需要动物。.缺点：不能根据体

2、外试验结果肯定或否定一个药物的抗菌作用。试验菌.细菌、霉菌和酵母菌常用.标准菌株：来自专门机构，我国是卫生部生物制品检定所菌种保藏中心提供。.临床分离株：经形态、生化及血清学等方面鉴定。不得有杂菌污染，不宜用传代多次的菌种，最好是重新活化的。控制培养时间。.接种菌量的多少的计算培养基.根据试验菌的营养要求进行选择.培养基质量控制供试药物.药物的浓度和总量要精确配制.供试药物用适宜溶剂溶解并稀释至所需浓度，难溶药物加助溶剂。.中草药或某些生药原粉的样品，应先提取，再浓缩至所需浓度对照试验.试验菌对照：在无药情况下，应能在培养基内正常生长.已知药物对

3、照：已知抗菌药对标准的敏感菌株应出现预期的抗菌效应，对已知的抗药菌应不出现抗菌效应。.溶剂及稀释剂对照：抗菌药物配制时所用的溶剂及稀释剂应无抗菌作用（一）连续稀释法.方法：液体法和固体法。.用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。.抑菌：药物可抑制微生物生长繁殖，但不杀死它，在药物除去后，微生物又可恢复生长.杀菌：药物能杀死微生物，当药物去除后，微生物不再继续生长。1、液体培养基稀释法.方法：两倍稀释法.步骤：液体培养基稀释药物成系列递减的浓度每管加入一定量试验菌24-48小时后肉眼观察试管浑浊情况，记录能抑制细菌生长的最低

4、浓度（MIC）将未见细菌生长的各试管内的培养液（各吸取0.1ml）移种到新鲜的琼脂培养基上重新长出细菌的只具有抑菌作用，无菌生长（菌落数﹤5个）具有杀菌作用，记录最低杀菌浓度（MBC）。液体稀释法图解抗菌药物的浓度增加最低抑菌浓度移种平板最低杀菌浓度图20-1液体培养基连续稀释法.优点：能与药物充分接触，结果更具有精确性和可重复性。.缺点：药液和培养基的混合物若不澄清，无法直接观察结果，需进一步试验才能确定MIC值。杀菌曲线.选择适当的药物浓度，取适量于无菌试管中，加入试验菌液，使各试管菌浓度约为105CFU/ml。.一定间隔时间内将试验管充分混

5、合后取样并稀释，用平板法进行活菌计数，绘制活菌数的对数-时间曲线。2、固体培养基稀释法.（1）平板法.方法：系列浓度的药物混入琼脂平板，用微量加样器或多点接种仪接种试验菌。.用途：用于各种药物的抗菌活性测定及新抗菌药物的筛选。特别适合于非酵母样的真菌药敏试验及颜色深、澄明度差的样品的抗菌作用测定。.优点：在一组平板中测定多种试验菌的MIC，不受药物颜色及浑浊度的影响；容易发现污染菌。.缺点：不易进行再培养而确定MBC。.（2）斜面法.方法：不同浓度的药物混入培养基中制成斜面，于斜面上接种一定量的试验菌，观察其MIC值。.用途：用于需长时间培养的试

6、验菌（如TB）或避免孢子飞扬污染环境的霉菌。.优点：不受药物颜色及浑浊度的影响；容易发现污染菌。.缺点：不易进行再培养而确定MBC。（二）琼脂扩散法.定性试验.基本方法：利用药物可以在琼脂培养基中扩散的原理，将试验菌加入琼脂培养基，混合倾注平板或用L棒使试验菌均匀分布，然后加药于含菌平板，培养18-24小时后，根据抑菌圈或抑菌范围大小初步判断抑菌作用的强弱。.用于细菌和酵母菌的药敏试验1、滤纸片法含药物的滤纸片含菌平板抑菌圈37℃培养K-B法.基本原理：滤纸片法，但需用统一的培养基、菌液浓度、纸片质量、纸片含药量以及其他试验条件。.结果判断：卡尺

7、精确量取，根据抑菌圈的直径大小判断该菌对该药物是抗药、中等敏感或敏感。.打孔并注入药液代替滤纸片含菌平板药液3、管碟法.小管（玻璃管、铝管、钢管）放于含菌平板上，小管内加入药液，根据抑菌圈直径判断抗菌效力。含菌平板小管药液4、挖沟法.于无菌平板上挖沟取出琼脂条，沟内加入药液，然后在沟两旁接种几种试验菌。.适用于一药多菌的测定。ABC12345药液细菌菌苔接种的细菌琼脂扩散法特点.优点：简单、快速、可同时进行多样品或多菌株的研究。.缺点：粗糙、重复性差、干扰因素较多，只用于抗菌药物的初筛。第二节杀菌试验一、最低杀菌浓度或最低致死浓度的测定.最低杀菌

8、浓度：指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生物广义而言，也可称之为最低致死浓度（MLC）。.MBC（或MLC）的含义也可定义为:在一定条