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1、双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF王立生李迎雪朱惠明,朱忠生马晓冬【关键词】双歧杆菌DNA;,巨噬细胞;,蛋白激酶C;,核因子 InfluenceofbifidobacteriumDNAonPKCandNFκBinmurinemacrophages [Abstract]AIM:ToexploretheinfluenceofDNAofbifidobacteriuaadolescenceonPKCandNKκBofmurinemacrophages.METHODS:Thefluorescentintensit
2、yofPKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCεandPKCζinmurineperitonealmacrophagesicroscope.ThedensityofNKκB+macrophagesmunocytochemicalstaining.RESULTS:TheaveragefluorescentintensityofPKCαandPKCβIIproducedbymouseperitonealmacrophagesinbifidobacteriumDNAinjectiongrouparkedlyhi
3、gherthanthatincontrolgroup（P0.01）.ThereacrophagesinbifidobacteriumDNAinjectiongrouparkedlyhigherthanthatincontrolgroup（P0.01）.CONCLUSION:DNAofbifidobacteriaadolescencecouldactivatemacrophagesbypromotingtheactivityofPKCα、PKCβIIandNFκB. [KeyDNA;macrophage;protei
4、nkinaseC;nuclearfactorκB [摘要]目的:探讨青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞中6种PKC和NFκB的影响。方法:通过激光共聚焦显微镜观察小鼠腹腔巨噬细胞中PKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCε和PKCζ的荧光强度,以免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞中NFκB+细胞的密度。结果:双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞中,PKCα和PKCβII的平均荧光强度明显高于对照组（P0.01）;而PKCβI、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则无统计学意义（P>0.05
5、）。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞中,NFκB+细胞的密度显著高于对照组（P0.01）。结论:青春型双歧杆菌的DNA可通过活化PKCα、PKCβII和NFκB来激活巨噬细胞。 [关键词]双歧杆菌DNA;巨噬细胞;蛋白激酶C;核因子κB 双歧杆菌是人体和动物肠道内数量最多的生理性厌氧菌,能调节肠道的微生态平衡,也有抗肿瘤、抗感染和免疫激活等多种重要的功能[1]。目前研究发现,双歧杆菌的DNA中含有非甲基化的胞嘧啶磷酸鸟嘌呤基序(cytidinephosphateguanosine,CpGDNA),可作为免疫刺激序列(
6、immunostimulatorysequence)激活树突状细胞(DC),上调其表面分子和共刺激分子(如CD69、MHCI、MHCII类分子、CD80以及CD86等)的表达。同时,其还能激活NK细胞和B细胞,使之产生较多量的IFNγ和抗体[2]。此外,其亦可激活巨噬细胞,增强其吞噬和细胞毒作用,并分泌较多量的IL1及IL6,但其具体的作用机制目前仍不清楚[3]。本研究中应用激光共聚焦显微镜和免疫细胞化学染色法,检测了青春型双歧杆菌的DNA对小鼠腹腔巨噬细胞中PKC和NFκB的影响,旨在探讨其激活巨噬细胞的信号途径。
7、 1材料和方法 1.1材料BALB/c小鼠,6~8周龄,雌雄各半,体质量为18~23g,购于南方医科大学实验动物中心。兔抗鼠PKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCε和PKCζ,购自Nea公司产品。其他生化试剂均为进口或国产分析纯。 1.2方法 1.2.1菌种来源及其培养双歧杆菌由本室从健康婴儿粪便中分离培养获得,经API20A及TAB系统和多次生化反应鉴定为青春型。实验时,将双歧杆菌接种至硫乙醇酸盐肉汤中,置厌氧培养箱,于37℃培养72h。将含菌培养液以3000r/min离心10min,去上清,
8、沉渣以PBS液洗3次,并调整细菌数为1×1013/L。 1.2.2双歧杆菌DNA的制备和鉴定将双歧杆菌接种于硫乙醇酸盐肉汤中,置厌氧培养箱中于37℃培养72h。收集细菌,加入溶菌酶（1g/L）与SDS（终浓度为10g/L）裂解菌体后,用饱和酚抽提去除菌体蛋白并透析。用紫外分光光度计测定所提取的双歧杆菌基因组DNA的A260/A280为1.97
