对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法

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1、对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法（修订稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items,PrinciplesandResultAssessment1试验项目动物实验分为方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）、方案二（急性酒精性肝损伤模型）和方案三（亚急性酒精性肝损伤模型）三种1.1方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）1.1.1体重1.1.2血清中谷丙转氨酶（ALT）1.1.3血清中谷草转氨酶（AST）1.1.4血清中乳酸脱氢酶（LDH）1.1.5肝组织病理学检查1.2方案二（急性酒精性肝损伤模型）1.2.1体重1.2.2血清甘油三酯（TG）1.

2、2.3血清极低密度脂蛋白（VLDL）1.2.4肝组织病理学检查1.3方案三（亚急性酒精性肝损伤模型）1.3.1体重1.3.2血清中胆固醇（CHOL）1.3.3血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL)1.3.4血清中胆红素（TBIL）1.3.5肝组织病理学检查2试验原则2.1所列指标均为必做项目。2.2根据受试样品作用原理的不同，方案一、方案二和方案三任选其一进行动物实验。3结果判定方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）在模型成立的前提下，ALT、AST和LDH中任两项血液生化指标阳性和病理结果阳性，可判定受试样品对化学性肝损伤有辅助保护功能。方案二（急性酒精

3、性肝损伤模型）：血清中TG、VLDL指标阳性和病理组织学检查结果阳性，可判定该受试样品具有对急性酒精性肝损伤有辅助保护功能功能。方案三（亚急性酒精性肝损伤模型）：①血清中CHOL、LDL和TBIL三项检测指标结果阳性，可判定该受试样品具有对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能作用；②-12-血清中CHOL、LDL和TBIL三项指标中任两项结果阳性，且肝脏病理组织学检查结果阳性，可判定该受试样品具有对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能功能。在急性或亚急性酒精性肝损伤结果判定中，任何一项方案为阳性时，可认为该受试物具有降低酒精性肝损伤危害功能。-12-对化学

4、性肝损伤有辅助保护功能检验方法MethodfortheAssessmentofAssistingtheProtectionAgainstChemicalInjuryofLiverFunction1方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）1.1原理刀豆蛋白A(concanavalinA,ConA)是一种在人体内对肝细胞有特异性毒性作用的植物凝集素，它能在体外激活T细胞的丝裂原，进入循环后首先活化T淋巴细胞，继而激活肿瘤坏死因子（TNF）和白介素2等细胞因子，引发炎症反应，可诱导淋巴细胞、巨噬细胞的细胞毒作用，通过肝细胞凋亡等多种途径损伤肝细胞。1.2实验动

5、物成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠（180-220克），每组8-12只；小鼠（18－22克），每组10-15只。1.3实验方法1.3.1剂量和分组至少设三个剂量组，同时设阴性对照组和模型对照组，必要时设溶剂对照组。以人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)一个剂量（等效应剂量），另设二个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量（以公斤计算）的30倍。1.3.2受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲料摄入量或饮水量。原则上连续给予30天，必要时可延长至45天。1.3.3实验步骤1.3.3.1造模方法每日

6、经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予纯净水。将动物每周称重两次，以调整受试样品剂量。模型组及各样品组于实验结束时一次尾静脉给予剂量为15～20mg/kg的刀豆蛋白A，小鼠10ml/kgBW，禁食8h后经腹腔注射60mg/kgBW的戊巴比妥钠溶液麻醉，腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。1.3.3.2检测指标体重、血清中谷丙转氨酶（ALT）、血清中谷草转氨酶（AST）、血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肝脏病理组织学变化。1.4血清ALT、AST和LDH的测定1.4.1检测方法血清中ALT、AST推荐采用速率法，LDH

7、推荐采用乳酸为底物的速率法（LD-L法）。血样离心（2500rpm）后取上清，血清中的ALT、AST和LDH的检测采用用全自动或半自动生化分析仪进行。1.4.2数据处理数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。方差齐，计算F值，-12-F值＜F0.05，各组均数间差异无显著性；F值＞F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。1.4.3结果判定模型对照组与阴

8、性对照组比较，血清ALT、AST和LDH含量升高有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品组