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《3m快速金黄色葡萄球菌数测试片操作以和判读》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、3M快速金黄色葡萄球菌数测试片操作以及判读一、测试金黄色葡萄球菌数操作方法 1、未拆封包请冷藏于≤8℃，并在保存期限内使用完。在高温度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。2-3、已开封时，将封口已胶带封紧，存放于25℃/湿度50%以下,并于一个月内使用完.请勿将已开封包冷藏于冰箱4、使用无菌的容器置入样品，已备将样品作10倍或更大倍数的稀释。5、加入适量的无菌稀释液:Butterfieldsphosphatebuffer(IDFphosphatebuffer,0.0425g/LofKH2PO4adjust
2、edtopH7.2),0.1%peptonewater,peoplesaltdiluent(ISOmethod6887),salinesolution(0.85-0.90%),bisulfite-freeletheenbroth,或无菌蒸馏水。不可用bufferedpeptonewater或buffered含有citrate,bisulfite,orthiosulfate;它们可能抑止菌生长。6、搅拌或均质样品。调整样品稀释液的pH值至6.5－7.5。请以1NNaOH调整酸性产品pH值，以1NHCI调整碱性产品。7、将测试
3、片放置在平坦的外表面，揭起上层膜。使用吸管将1ml样品垂直低在测试片的中央处。8、小心卷会上层膜，避免气泡进入。不要让上层膜直接盖回。9、使用压板放置在上层膜中央处。轻轻的压下，是样品液均匀覆盖于圆形的培养面积上。且勿扭转或滑动亚板。拿起亚板，静置1分钟以使培养基凝固。10、测试片的透明膜朝上可堆叠至10片，培养于35℃＋1℃或37℃＋1℃下，24＋2小时。11、培养之后，菌落可能生长，但在检测片上看不到，因为指示剂是含在金黄色葡萄球菌检测反应片上。12、检测片移至36℃＋2℃培养箱，培养1－4小时。注意：如果菌落需要进一
4、步测试，检测片培养不要超过一个小时。13、使用无菌镊子取出圆形的反应片，再掀开检测片上层膜小心置入反应片。在江上层膜放下。14、为了确定反应片与培养胶均匀接触及避免夹带任何气泡，可以使用一个弯曲的玻璃棒（L玻璃棒）轻压检测片。15、将已置入反应片的金黄测葡萄球菌检测片培养于35℃＋1℃或37℃＋1℃，1－3小时。16、可目视或使用菌落计数器并可参读判读卡计算菌落数。17、菌落可以分散做为进一步的鉴定，掀起上层膜，有培养胶上挑起菌落。二、测试金黄色葡萄球菌数判读方法 快速金黄色葡萄球菌检验测试片（PetrifilmRSN）由
5、两部分组成，第一部分是金黄色葡萄球菌培养基片，次检验片含有修正Baird-Pdker营养物几一冷水可溶解的胶质，第二部分是热安定核酸酶（TNase）反应片，包含有DNA，ToludineRSN-O（甲苯胺篮）及四唑指示剂(Terazolium),此一指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌热安定核酸酶的存在.热安定核酸酶是一种金黄色葡萄球菌的酵素产物,在高温下能维持稳定,热安定核酸酶的检测象凝固酶反映一样,是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法.在PetrifilmRSN检测片上，热安定核酸酶反应看起来像是粉红色环带包围着的一个红色、
6、或篮子菌落.PetrifilmRSN检测片必须与Petrifilm热安定核酸酶反应片一起使用,单独使用将不会显示菌落,因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上,而不是在PetrifilmRSN检测片上。S.aureuscount=22本图片显示一个典型的petrifilmRSA检测片上的金黄色葡萄球菌的菌落,计算所有粉红色环带的菌落既是S.aureus,菌落可能是红色或蓝色.S.aureuscount=0图2显示一个置人petrifilm热安定核酸酶反应片的petrifilmRSA检测片,在这检测片上看不到菌落或热安定核酸
7、酶环带.S.aureuscount=4热安定核酸酶反应的一种指示剂造成金黄色葡萄球菌呈红色菌落,第二种指示剂使得热安定核酸酶环带显示粉红色.S.aureuscount=36因为有些金黄色葡萄求菌只生产少量的热安定核酸酶,所以无论大小计算所有的Tnase环带菌落为金黄色葡萄球菌.PetrifilmRSA检测片上Tnase环带的适当计数范围大约是15-100个菌落.计数范围高低端视金黄色葡萄球菌生产Tnase环带量的多寡及其他菌相生长状况.S.aureuscount=38Estimateds.aureuscount=150Pe
8、trifilm图形的生长面积大约30平方公分.可以估算方式,先数三个方格内粉红色环带的数量,在乘以10,即为所有在图形培养范围内的菌落数.有些金黄色葡萄球菌产生大量的热安定核酸酶.这一类的金黄色葡萄球菌,于最后一阶段培养时,只需30分钟培养既可计算.因为已形成可目测的Tnase环带.注意:图4与图5有大
