猪伪狂犬病课件_1

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1、猪伪狂犬病吕茂杰2010.10.1猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies，PR)PR是由伪狂犬病病毒引起的一种急性传染病。临床上以发热、奇痒及脑脊髓炎为特征。感染猪的特征为体温升高，新生仔猪表现神经症状，还可侵害消化系统。成年猪常为隐性感染，妊娠母猪感染可引起流产、死胎和呼吸系统症状，无奇痒。PR广泛流行于世界各国，20世纪90年代末，我国有扩大流行趋势。病原学猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)，又称猪疱疹病毒Ⅰ型为疱疹病毒科的成员之一。病毒颗粒直径约150nm的有囊膜病毒，衣壳呈20面体立体对称，内有线状卷轴样基因组，是单分子双股线状DNA；PRV只有

2、一个血清型；PRV的毒力由几种基因协同控制，主要有gE、gD、gI和TK基因；培养特性本病毒具有泛嗜性，能在多种组织细胞内增殖，但表现的敏感度不同，其中以兔肾和猪肾细胞（包括原代和传代细胞系）最适于病毒的增殖，病毒引起的细胞病变明显。开始呈现散在的病灶，随后逐渐扩展，直至全部细胞溶解脱落；细胞病变最明显的时期为接种后48-96h。兔肾和猪肾细胞最适于做蚀斑试验，可根据蚀斑大小和形状来对病毒株进行鉴定；强毒株大多形成小而不规则的蚀斑，弱毒株的较大，弱毒疫苗株的最大，直径可达8-10mm；本病毒还可以在猴、牛、羊和犬的肾细胞，家兔、豚鼠和牛的睾丸细胞，Hela细胞，鸡胚和小鼠成纤维细胞等多种细胞

3、内增殖；应用鸡胚做绒毛尿囊膜接种，强毒株于接种后3-4d在绒毛尿囊膜表明出现较大而隆起的痘泡样病变和溃疡；随后因严重侵袭神经系统，导致鸡胚死亡，死亡鸡胚主要变化弥漫性出血和水肿，尤其以头盖骨表面皮肤的出血，局部呈突起状；流行病学易感动物：可自然感染猪、牛、羊、犬、猫、貂、狐狸及鼠类等各种动物。4周龄内仔猪感染此病，病情严重，死亡率高成年猪多隐性感染，怀孕母猪感染可发生流产或死胎传染源：病猪、带毒猪以及带毒鼠类为本病重要传染源。传播途径：直接接触传播、消化道传染、经皮肤伤口、呼吸道也可传播PRV。猪配种时可传染本病。妊娠母猪感染PRV时，常可侵害子宫内的胎儿，引起流产、死胎等。发病季节--寒冷

4、季节（有利于病毒存活）临床症状①母猪群出现繁殖异常，妊娠母猪发生流产、死产、木乃伊胎，其中以产死胎为主。②引起新生仔猪大量死亡（第2天发病，3-5天达高峰），特别是一周龄内仔猪发病率及死亡率几乎100%；断奶仔猪死亡（发病率20-40%，死亡率10-20%）。③断奶仔猪群及育成猪群出现中枢神经系统病损综合征候群，呼吸器官感染症和腹泻症剧增。病理变化肾脏表面针尖大出血点肺水肿、出血肝脏坏死灶脑膜充血、出血扁桃体坏死诊断(1)动物接种：可采取病猪的扁桃体、大脑、肺脏、脾脏为病料，用生理盐水或PBS制成10%悬液，经离心后取上清液接种于家兔皮下或小白鼠脑内，家兔经2~5d或小白鼠经2~10d发病死

5、亡，死前大多数家兔及小白鼠的注射部位发生剧痒和四肢麻痹。(2)鸡胚接种：取上述上清液接种于9~11日龄鸡胚绒毛尿囊膜，经3~4d后形成特征性痘疱样白斑，死亡的鸡胚神经系统出血导致胚胎颅腔突出。(3)血清学方法：免疫荧光试验、琼脂扩散试验、病毒中和试验、补体结合试验、ELISA和乳胶凝集试验等。家兔经2~5d或小白鼠经2~10d发病死亡，死前大多数家兔及小白鼠的注射部位发生剧痒和四肢麻痹乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病血清抗体阳性反应阴性反应狗对伪狂犬非常敏感，因而可以作为伪狂犬病的信号以无故失踪或死亡为特点病毒的分离鉴定病毒的分离采集病料：采发病畜的脑组织和扁桃体；病料处理：将组织研碎，冻融，用P

6、BS洗液制成10%悬液；经2000rmp/min离心，取上清作为感染动物或细胞培养物的接种材料；猪肾继代细胞系（PK15)以及兔、猪和牛的原代肾细胞最适于本病的分离培养；长成单层的细胞，接入细胞培养体积10%的组织悬液，于37℃作用1h，使病毒吸附，然后以维持液补足液量，继续培养，一般当样品病毒含量高时，于18h开始出现细胞病变，但多数在接毒后48h出现细胞病变，病毒浓度低时，需要96h以后。此时将细胞培养物做HE染色，镜检可发现嗜酸性核内包涵体。祁贤等（2002）从上海某猪场发病仔猪体内分离到1株病毒．该毒株能在鸡胚成纤维细胞、RK、Vero、BHK-21、ST、Marc-145、PK-1

7、5细胞上增殖并产生细胞病变，接种结果表明接种这些细胞的CPE相似；并利用BHK-21对该毒株进行了纯化；分离毒经3次蚀斑克隆后．在BHK-21细胞上产生较为规律的细胞病变．一般在12h出现病变．24~36h病变细胞可达80%；江焕贤等（1993）利用兔肾传代细胞和乳兔肾原(或传)代细胞分离了京A株（接毒后20h左右出现病变）；黄伟坚等（2000）分离了桂W株，利用RK细胞分离，接种细胞在24h左右出现病变，4