辽宁绒山羊褪黑激素合成酶(aa

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1、辽宁绒山羊褪黑激素合成酶(AA第一章文献综述1.1研究背景和意义我国的羊绒产量和贸易量在世界上占有绝大的市场份额，约占世界的50%以上，因此绒山羊养殖业是我国出口创汇和广大农牧民发家致富的重要途径[1]。世界上完全以产绒为主的山羊品种极少，多数为绒肉兼用品种。我国主要的绒山羊品种有辽宁绒山羊、内蒙古白绒山羊、河西绒山羊；普通绒山羊品种有西藏山羊、新疆山羊、太行山羊、中卫山羊，但以辽宁绒山羊和内蒙古白绒山羊这两个品种最为著名[2]。辽宁绒山羊作为本研究的试验动物，具有体型高大、遗传性能稳定、改良低产绒山羊品种效果好等资源优势；另外，辽宁绒山羊在产绒方面还

2、具有产绒量高、绒纤维长而细度适中、羊绒细而柔软、颜色洁白光亮和手感好等特点，且绒纺织品具有薄、轻、暖、舒适等特点。因此一直是我国绒山羊养殖业的国宝。是我国明令禁止出口和重点保护的品种资源。在过去各地方引种改良地方品种的工作中起到了重要作用，为我国绒山羊的发展做出了积极贡献[3]。褪黑激素（Melatonin，MLT）是在下丘脑松果体内分泌，继而被运送到机体的不同部位参与生理学和病理学等多种生物学过程的吲哚类激素[4]。它在体内的合成和分泌具有较为规律的季节性和昼夜节律性，其伴随光照强度的季节性变化规律特性恰好与山羊绒的生长周期一致。早在1995年，Ji

3、a等[5]就发现，山羊绒的生长虽然不受采食蛋白水平的影响，但是能被埋植的褪黑激素所调控。在褪黑激素的合成过程中，芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶（又称5-羟色胺-N-乙酰转移酶）(aralkylamineN-acetyltransferaseAA-NAT)基因是其中最重要的关键基因，将产物甲基化作用后转化得到褪黑激素[6,7]。过去的研究主要集中在褪黑激素对绒毛生长发育及对产绒量等的影响方面，对褪黑激素合成过程中的限速酶基因多态性对山羊产绒性能影响的研究几乎没有。尤其是AA-NAT在辽宁绒山羊上的研究更是空白。..1.2MLT的生物合成、分泌及调控松果腺在

4、很长的一段时间里一直被视为一个无特殊功能的退化器而存在。直到1958年，Lerner等[8]人在牛松果腺中提取得到了一种物质，并将该物质作用于两栖类动物，结果动物皮肤颜色变浅，也因此而将其命名为褪黑激素（MLT），松果腺也从此被人们所重视。具体来说，MLT就是由松果腺细胞在暗环境内从血液中摄取色氨酸及其羟化酶逐步合成的一种吲哚类激素，其化学结构为N-乙酰基-5-甲氧基色胺，分子量为23.2kDa[9]。这种MLT并不同于哺乳动物体内的其他吲哚类激素，它多了一个甲氧基的侧链。在过去的许多研究报道中，MLT的分布及其合成与分泌的动向，可测定其合成通路中的羟

5、基吲哚-O-甲基转移酶（HIOMT）的活性来判断[10]。并且由于合成MLT的前体物5-羟色胺（5-HT）以及合成通路限速酶AA-NAT的合成和分泌具有规律的夜多昼少的波动性，因此MLT也表现为夜间分泌量增加而白天分泌量减少的波动。.第二章材料与方法2.1实验材料2.1.1实验动物及产绒数据的收集选取供试动物辽宁绒山羊共256只(吉林省农业科学院畜牧分院养羊场、吉林养哼农牧业发展责任有限公司)，颈静脉采血9ml左右，ACD抗凝，放置在冰盒内带回实验室后置于-20℃冰柜冷冻保存。（部分血液用来提取基因组DNA，部分则送至生物公司测定血浆中褪黑激素含量）。

6、采集血液的同时，收集了64个个体的产绒数据。ACD抗凝剂：称取14.7g葡萄糖，4.8g柠檬酸，13.2g柠檬酸钠，加适量水溶解，1000ml容量瓶加双蒸水定容，高压高温灭菌：110℃，120Pa，20分钟。LB固体培养基的配制：酵母浸出物(2g)、胰蛋白胨(4g)、氯化钠(4g)，琼脂粉（3g），去离子水（400mL）。高压高温灭菌：110℃，120Pa，20分钟。LB液体培养基：胰蛋白胨(4g)、酵母浸出物(2g)、氯化钠(4g)，去离子水（400mL）。高压高温灭菌：110℃，120Pa，20分钟。CaCl2溶液(0.05mol/L)：无水CaC

7、l20.28g，双蒸水50mL，溶解后100mL容量瓶加双蒸水定容，高压高温灭菌：110℃，120Pa，20分钟，4℃冰箱内保存。NaAc(3mol/L)：NaAc3H2O（40.81g）、50mL双蒸水，冰醋酸调pH值至5.2，100mL容量瓶加定容，4℃冰箱内保存。Tris-HCl(1M)：Tris碱（121.1g）、蒸馏水700mL，浓HCl调pH值至8.0，1000mL容量瓶加双蒸水定容，4℃冰箱内保存。..2.2方法2.2.1基因组DNA的提取和浓度、纯度测定血液基因组DNA的提取①1.5mL离心管中加入BufferAP1500μL溶液

8、。②吸取250μL抗凝血转移到步骤1的离心管中，移液枪反复吹吸几次，涡振荡10s。③小心