教务处通知（2002）第（045）-中国农业大学植物保护学院

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1、中国农业大学本科生“URP”立项申请书项目名称拟南芥免疫信号减弱突变体L8的表型分析和基因图位克隆申请人崔福浩工作单位植物保护学院联系电话13521121961电子信箱cuifuhao@163.com填表日期2018年4月23日中国农业大学教务处制3项目名称拟南芥免疫信号减弱突变体L8的表型分型和基因图位克隆项目起止时间2018年5月至2019年5月项目申请人情况姓名崔福浩性别男出生日期1985.03.18最后学历与学位博士研究生专业技术职务副教授从事专业植物病理学一、项目概况拟南芥PTI响应基因FRK

2、1的表达通过其启动子的活性来调控，而FRK1启动子活性可以作为PTI信号途径强弱的重要指标。因此，我们将FRK1启动子与荧光素酶报告基因LUC融合，通过检测荧光素酶活性来表征PTI信号传导途径的强弱。我们前期构建了pFRK1::LUC植物表达载体，通过遗传转化拟南芥Col-0生态型，获得pFRK1::LUC转基因拟南芥纯合体。然后，利用EMS对pFRK1::LUC转基因拟南芥种子进行诱变，最终获得PTI信号传导途径突变体库。通过初步筛选，我们获得了一个flg22处理后LUC值显著下调的突变体L8，推测其

3、抗病性可能减弱，因此，计划通过蛋白激酶活性测定、活性氧爆发、PTI响应基因测定，以及抗病性测定等，来明确L8的抗病表型，并对目的基因进行图位克隆，为揭示该突变体中目的基因的作用机理奠定基础。二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法)实验计划：1、2018年5月-2018年6月：阅读整理相关文献，熟悉和了解植物PTI信号途径的研究进展，检测突变体L8对丁香假单胞细菌的抗病性，构建图位克隆群体。2、2018年7月-2018年8月：检测细菌鞭毛蛋白等PAMPs处理后，突变体L8中

4、活性氧爆发的情况，以及细菌鞭毛蛋白处理不同时间后，pFRK1::LUC活性的变化曲线。3、2018年9月-2018年12月：检测突变体中MAPKs在鞭毛蛋白处理后的激活、内源FRK1基因的诱导表达情况等，对L8进行基因图位克隆。4、2019年1月-2019年4月对突变体L8进行基因互补，检测pFRK1::LUC活性能否回复至野生型水平。三、项目实施的基础和条件3本项目已获得pFRK1::LUC活性显著降低的突变体L8，并且对其进行了突变体基因显隐性检测，且本课题组具备成熟的植物抗病性检测、免疫反应检测、

5、基因图位克隆、拟南芥转基因等技术，为项目实施在理论和技术上奠定了坚实基础。四、学生提交的成果1、提交文献综述和进展报告。2、获得L8对细菌鞭毛蛋白处理后pFRK1::LUC活性的变化曲线图、ROS图、MAPK激活图、抗病性检测结果图。五、经费预算申请经费2000元，用途如下：1）试剂费用主要用于购买组培实验常用试剂等。2）材料费主要用于打印、复印、装订文献及相关资料。六、学院URP领导小组意见签字（盖章）年月日3