实验二：淀粉酶活性测定实验报告

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1、实验二：淀粉酶活性测定实验报告淀粉酶活性的测定一、实验目的酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研宄酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。a-淀粉酶是一种典型的内切型淀粉酶，主要作用于淀粉水解的液化阶段，因此又叫液化酶。作为一种最重耍的工业酶制剂，a-淀粉酶广泛存在子动物，植物和微生物屮。其中，微生物a-淀粉酶以其经济易得成为工业生产主要来源。目前，关于a-淀粉酶活性的测定方法很

2、多种。本实验采用杨氏改良法测定a-淀粉酶；掌握测定ci-淀粉酶活性大小与温度关系的方法，通过分析得出酶的最适温度范围。、实验原理酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和pH值称为某种酶作用时的最适温度和pH值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低，其变化趋势呈钟形曲线变化。不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。a-淀粉酶属水解酶，

3、作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的a-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称a-淀粉酶为液化淀粉酶。a-淀粉酶不能水解淀粉支链的a-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和a-1,6键的寡糖。本实验通过淀粉遇碘显蓝色，淀粉含量越高，颜色越深。用分管光度计检测显色效应大小，通过分管光度值计算酶活力注意：实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最

4、终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，三支测定管及空白管不要混淆。三、材料、试剂与仪器实验材料：a-淀粉酶仪器：分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干试剂：①0.4MNaOH/0.4MCH3C00H及0.1MHCI：②0.005%工作碘液:0.5克12和5.0克KI水中研磨，定容至1000mL；③1%糊化淀粉溶液：称取1.0克淀粉，加入25mL0.4MNaOH,60°C5min,冷却后加25mL0.4MC

5、H3COOH,定容至100mL；①稀释a-淀粉酶溶液：待测样品四、实验步骤①lOmLl%淀粉溶液加入试管屮，室温25/45/65°C保温lOmin②于每管中各加酶稀释液lmL，在室温25/45/65DC恒温水浴中（水浴温度的变化不应超过±0.5°C）准确加热lOmin，冷却。③加ImLIM盐酸终止反应。②取上述混合液ImL加入预先装好10mL工作腆液的试管，摇匀。③660nm测吸光度（蒸馏水调零），记录数据。（注：吸光度测定勿漏空白对照组）对照组为不加酶液，加相应体积的水五、数据整理及计算根据以上

6、的数据整理的结果，结合以下公式计算两种淀粉酶的活性:酶活=[（DO-D）*1OO/DO*1O]*稀释倍数D—反应混合液吸光度DO—对照组吸光度100—系数（％）10—反应时间酶活定义：1克a-徙粉酶单位相当于在pH5.0,温度25、45、65°C,1min将浓度为1%的淀粉溶液的显蓝强度降低1%时所需酶量。