凤尾蕨属6种药用植物抗肿瘤有效部位筛选

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1、凤尾蕨属6种药用植物抗肿瘤有效部位筛选【关键词】凤尾蕨属;抗肿瘤作用;有效部位　　Abstract：ObjectiveToscreentheactivefractionoreffectfrom6medicinalplantsofPterisL..MethodsThesamplesofthe6plantsether,ethylacetate,n-Butylalcoholinturntogetthreefractions.Thentheantitumoreffectoftheextractsethod.ResultsEthylacet

2、ateandn-BuOHextractsofPterissemipinntaL.,petroleumether,ethylacetateandn-BuOHextractsofP.disparKze.,ethylacetateandn-BuOHextractsofP.multifidaPoir.,ethylacetateextractofP.ensiformisBurm.,andn-BuOHextractofP.linearisL.anlungcancercellA549.ConclusionTheextractsoftheplan

3、tsfromPterisareprovedtobetheantitumoractivefractionsinvitro.　　Keyoreffect;Activefraction　　半边旗药材为于凤尾蕨属植物半边旗PterissemipinntaL.的干燥全草[1]。从中分离到的二萜类化合物5F、6F和A具有抗肿瘤作用[2,3]，其中5F含量较高，但活性不是很强，6F和A活性很强，但其在原植物中的含量太低而不能开发利用。2006年由我们申报，半边旗药材被广东省食品药品监督管理局批准为广东省地方药材标准品种。根据药用植物亲缘学的原理，

4、亲缘关系相近的植物其所含化学成分相似，而化学结构相似的化合物其生理活性多相似[4]，因此，我们在研究半边旗抗肿瘤作用的基础上，对与半边旗同属的其他5种药用植物的抗肿瘤药效部位进行了筛选，以期发现抗肿瘤活性强的含量较高的二萜类化合物。　　1仪器与材料　　1.1仪器旋转蒸发仪，AE-240天平;NAPCOseries5400CO2培养箱，Elx酶标仪(Bio-TEK-INSTUMENTSINC产品);96孔培养板(美国Costar)。　　1.2材料乙醇、醋酸乙酯、正丁醇(分析纯);小牛血清(杭州四季青生物材料有限公司);RPMI164

5、0培养基(GIBCO);二甲基亚砜(DMSO)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、胰蛋白酶、甲基噻唑蓝(MTT)(美国Sigma公司)。半边旗PterissemipinntaL.采于广州市郊，刺齿半边旗P.disparKze.、井栏边草P.multifidaPoir.、剑叶凤尾蕨P.ensiformisBurm.、蜈蚣草P.vittataL.采于广东湛江，线羽凤尾蕨P.linearisL.采于广东东莞，由广东医学院生药学副教授苟占平博士鉴定。人肺癌A549细胞株，由本实验室传代培养。　　2方法　　2.1实验药品的制备将采集的6种新鲜样品半

6、边旗、刺齿半边旗、井栏边草、剑叶凤尾蕨、蜈蚣草、线羽凤尾蕨放于阴凉处晾干，粉碎。取上述6种粉碎的样品各50g，加乙醇500ml，水浴回流提取2次，3h/次，合并滤液，滤液减压浓缩至干，浸膏加水溶解，依次用石油醚(60～90℃)、醋酸乙酯、正丁醇萃取，将萃取物减压浓缩至干，得到上述6种样品的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇干膏。以上18种干膏先用DMSO溶解，再加PBS溶解，精确配制成2400μg·ml-1的储存液(DMSO的体积分数=1%)，过滤除菌，放4℃冰箱备用。　　2.2细胞培养人肺癌A549细胞培养于含10%小牛血清、100kU·

7、L-1青霉素、100mg·L-1链霉素的RPMI-1640培养液中，在37℃、5%CO2培养箱中培养，取对数生长期的细胞用于实验。　　2.3细胞增殖抑制试验(MTT法)取对数生长期的人肺癌细胞A549，用0.25%的胰蛋白酶消化，10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液调制成5×104个·ml-1的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种100μl。在37℃、5%、CO2条件下培养过夜后，吸出培养液，加入新培养液180μl及药液20μl。待测样品中DMSO终体积分数=0.1%，干膏样品的终浓度分别为30，60，120，240μg·

8、ml-1，每个浓度平行6孔;培养72h后，每孔加入5mg·ml-1的MTT20μl，37℃，5%CO2条件下温育4～6h，弃去上清液，每孔加入150μlDMSO，在微型振荡器上摇匀15min，结晶溶解后，立即比色，在酶标仪主波长为570nm，参比波