2018甘肃科学技术奖推荐项目公示

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1、2018年度甘肃省科学技术奖推荐项目公示序号申报奖种项目名称完成单位完成人项目简介（关键技术与创新点、论文专著专利等知识产权情况）科技进步奖组蛋白泛素化修饰酶在DNA损伤修复过程中作用的研究兰州大学甘肃省医学科学研究院王德贵，刘向文，田迎霞，宋焱峰，张朗，洪建平，沈蓉，杨旭光，任银祥，谢坤人体细胞内的DNA受外界环境和生理过程影响，每天会接收到平均上万次损伤。如果这些损伤得不到及时修复或不能准确修复,就会导致突变的产生和基因组的不稳定,从而威胁机体的生存。DNA损伤后需要泛素化修饰组蛋白,使得受损DNA开放并且招募修复相关

2、蛋白到损伤位点进行修复。新的参与DNA损伤修复的泛素交联酶E2（以下简称E2）,泛素连接酶E3（以下简称E3）及新发现的底物蛋白不断涌现。综合现有文献和数据库,目前已知的可能具有E3功能的蛋白有600多个，但E2只有41个。这些E2都具有共同的保守蛋白结构域-UBCc-domain。我们已克隆这41个E2,希望观察到能够在DNA损伤位点形成foci的E2(这些参与DNA损伤修复过程的蛋白会在损伤修复位点进行聚集,称为foci)。E2形成的foci是短暂和微弱的，E2的foci观察困难,为此我们在实验中摸索出新的有效的方法，

3、寻找参与DNA损伤修复的新的E2，并观察到了UBC13和RNF8是相互作用的E2和E3，这两个蛋白在DNA损伤位点共定位,形成明显的foci。也观察到了RAD6和RNF168也是一对相互作用的E2，E3。我们后期的研究证实了RAD6基因缺失细胞对放射线敏感性高于非缺失细胞，并且修复所需时间延长。最关键的是我们发现了在RAD6基因缺失细胞在DNA损伤后，细胞中BRCA1和53BP1形成foci减少，这就提示RAD6参与了BRCA1、53BP1这一通路，RAD6参与这一通路还未被揭示，这是首次发现，我们也通过实验初步确定了RA

4、D6在这一通路中的大致位置。我们在RAD6基因缺失细胞中下调RAD18，hBre1，UBR1和RNF168，通过以上实验我们确定了RAD6在G2/M监测点发挥调控细胞周期作用。在研究两者泛素化底物时结果显示RAD6/RNF168可以泛素化组蛋白H1.2，但另外发现的UBC13/RNF168不能泛素化组蛋白H1.2，但可泛素化H2A和H2B。我们找到新方法，能够观察到E2的foci，解决了E2难以观察的难题，并将新发现的E2/E3用于多种疾病研究，发现它们在精子的形成、膀胱癌的放射治疗、以及神经退行性变中都发挥着重要的作用。

5、此外，这些基因片段由生物科技开发有限公司进一步开发应用与科研服务，取得了很好的经济效应和社会效应。主要完成人情况:姓名排名技术职称工作单位对本项目技术创造性贡献王德贵1教授兰州大学课题负责人，在实验中通过长期摸索，找出新的有效的方法通过在细胞中共转E2和E3的方法能够观察到E2在DNA损伤位点形成的foci。能够观察到E2的foci，解决了其难以观察的难题，具备了研究E2的有利条件。进一步观察到了RAD6和RNF168是一对新的有功能的E2,E3组合刘向文2讲师兰州大学RAD6和RNF168泛素化作用底物的研究，通过系列实

6、验确定了RAD6与RNF168相互作用的泛素化底物为组蛋白H1.2.RAD6的细胞周期调控作用研究，主要在G2/M监测点发挥调控细胞周期作用。田迎霞3主任医师甘肃省医学科学研究院构建成功了RAD6与RNF168点突变体和缺失突变体GST-pulldown验证RAD6和RNF168相互binding宋焱峰4教授兰州大学分子生物学实验技术及实验动物造模指导及把关张朗5副教授兰州大学RAD6对DNA损伤后细胞G1/Scheckpoint检测洪建平6讲师兰州大学RAD6基因敲除小鼠自发肿瘤观察沈蓉7讲师兰州大学RAD6基因敲除小鼠

7、诱发肿瘤观察杨旭光8讲师兰州大学MNU诱导膀胱癌实验任银祥9实验师兰州大学RAD6基因缺失细胞转染RAD6对细胞BRCA153BP1的foci的影响谢坤10讲师兰州大学免疫组化和分子生物实验及仪器设备的操作