2010显微鉴定方法

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1、附录ⅡC.显微鉴别法          显微鉴别系指用显微镜对药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。        一、药材（饮片）显微制片       1、横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片,必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1~2滴，盖上盖玻片。必要时滴加

2、水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。                  二、粉末制片 供试品粉末过四号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。                                              三、表面制片 将供试品湿润软化后,剪取欲观察部位约4mm2，一正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。          四、解离组织制片 将供试品切成长约5mm、直接约2mm的段或厚约

3、1mm的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。          1．氢氧化钾法 置供试品于试管中，加5％氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。                                                         2．硝铬酸法 将供试品置试管中,加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上

4、法装片。          3．氯酸钾法 将供试品置试管中，加硝酸溶液(1→2)及氯酸钾少量,缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。         五、花粉粒与孢子制片  取花粉、花药（或小的花朵）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心,取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸(9∶1)的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次,取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加5

5、0%甘油与1%苯酚各1~2滴，用品红甘油胶［取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml3，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得］封藏。         六、磨片制片  坚硬的动物、矿物类药，可采用磨片法制片。选取厚度约1~2mm的供试材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上往返磨砺，待两面磨平，且厚度约数百微米时，将材料移置细磨石上，加水，用软木塞压住在材料上，往返磨砺至透明，用水冲洗，再用乙醇

6、处理和甘油乙醇试液装片。      二、含饮片粉末的制剂显微制片       按供试品不同剂型，散剂、胶囊剂（内容物为颗粒状，应研细），可直接取适量粉末；片剂取2~3片，水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂等（包衣者除去包衣），取数丸或1~2锭，分别置乳钵中研成粉末，取适量粉末；蜜丸应将药丸切开，从切面由外至中央挑取适量样品或用水脱蜜后，吸取沉淀物少量。根据观察对象不同，分别按粉末制片法制片（1~5片）。        三、细胞壁性质的鉴别                                                           1．木

7、质化细胞壁 加间苯三酚试液1～2滴，稍放置，加盐酸1滴,因木质化程度不同,显红色或紫红色。                                                        2．木栓化或角质化细胞壁 加苏丹Ⅲ试液，稍放置或微热，显橘红色至红色。           3．纤维素细胞壁 加氯化锌碘试液，或先加碘试液湿润后，稍放置,再加硫酸溶液(33→50)；显蓝色或紫色。                                              4．硅质化细胞壁 加硫酸无变化。                 

8、                                四、细胞内含物性质的鉴别