人上皮型钙黏蛋白e-cad酶联免疫分析elisa

《人上皮型钙黏蛋白e-cad酶联免疫分析elisa》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、TEL:4001610125Web:www.shhz99.comCatalog#:95193Hu人上皮型钙黏蛋白(E-Cad)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书96t目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人上皮型钙黏蛋白(E-Cad)的含量。检测范围：5.0ng/L-100ng/L实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人上皮型钙黏蛋白(E-Cad)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入人上皮型钙黏蛋白(E-Cad)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TM

2、B显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人上皮型钙黏蛋白(E-Cad)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人上皮型钙黏蛋白(E-Cad)浓度。试剂盒组成：ReagentQuantity酶标包被板12well×8strips标准品:480pg/mL1×0.5ml标准品稀释液1×1.5ml酶标试剂1×6ml样品稀释液1×6ml显色剂A液1×6ml显色剂B液1×6ml终止液1×6ml30倍浓缩洗涤液1×20ml×30flod说明书1封板膜2密封袋1样本处理及要求

3、：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。TEL:4001610125Web:www.shhz99.comCatalog#:95193Hu4

4、.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（200

5、0-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.标准品：其浓度为1,00pg/mL(贮液)。先将其稀释为100pg/mL(标准曲线最高浓度)后，再准备5个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成100pg/mL,50pg/mL,25pg/mL,12.5pg/mL,6.25

6、pg/mL,3.12pg/mL,，标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液Tube012345pg/mL1.00502512.56.253.122.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉

7、封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应TEL:4001610125Web:www.shhz99.comCatalog#:95193Hu在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏

8、环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应