实验六 脂肪酸的反向层析

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1、实验六植物种子不饱和脂肪酸的反相纸层析一、目的通过操作练习，初步掌握用纸层析法测定油菜籽中脂肪酸的组成的方法。在纸层析中，通常支持相是含水的，移动相是有机溶剂。但是脂肪酸等化合物宜用有机溶剂为支持相和含水溶剂为移动相，这样能更好的进行分配，即“反相纸层析法”。由于不同的脂肪酸在两相中分配系数不同，所以在层析滤纸上移动速率就有差异，这样就使混合脂肪酸各组分被分开。然后用醋酸铜处理，将脂肪酸转化为相应的铜盐，再用红氨酸显色（也可不用，直接烘干），即可得到蓝灰色点状层析图谱。二、实验原理二、实验原理脂肪酸甲酯三、器材和试剂1、器材层析缸，层析纸，直尺，铅笔，微量移液器等2、试剂5

2、%的KOH-CH3OH溶液；10%石蜡-石油醚溶液；1M的HCl溶液；石油醚；1%的醋酸铜溶液；0.03%的红氨酸溶液。四、实验步骤1、样品制备①取10粒成熟的油菜种子于10ml离心管中，加1mlKOH-CH3OH溶液，并将样品用玻璃棒捣碎，酯化6~8h(40℃)。②加入HCl1.8ml及1ml石油醚,摇匀约5min，静置分层（上清澄清）。2、点样①在层析纸（10cmX11cm）一边用1.5cm处铅笔轻轻画一条直线，每隔1.5cm点一小点，并编号；②将层析纸放入石蜡油中浸透30s，取出晾干；③在层析纸各编号处用针刺一小孔（孔不能太大），然后取样品上清液10μl，10μl，1

3、5μl，15μl，20μl，20μl按编号顺序滴入孔洞处。3、展开溶剂系统与条件①将点好样的层析纸直立放入盛有醋酸溶液的长方形层析缸中（使编号朝下）。醋酸溶液的多少以能浸泡层析纸但液面低于点样处为宜。②展开至溶液上升到纸的最上端1~2cm后，，取出层析纸，烘干(烘箱37℃)。4、显色①将层析纸浸入醋酸铜溶液中10min(摇床，37℃)，使生成脂肪酸铜盐.用清水稍加冲洗，再放入洁净的瓷盘中，用流水漂洗45min左右。②将层析纸小心取出，用干毛巾或滤纸吸干大部分水分后，置于40℃烘箱中干燥。③观察蓝灰色的斑点结果与分析绘出反相纸层析色谱上五种不饱和脂肪酸的位置的示意图。18C，

4、三烯18C，二烯18C，一烯20C，四烯22C，一烯思考题分离不饱和脂肪酸为何要用反相纸层析法？不用反相而利用一般的纸层析，会出现什么结果？漂洗时间长短是否和实验结果清晰程度相关?