基因突变的检测ppt课件

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1、基因突变的检测一、突变类型营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或者自然突变失去合成某种营养（氨基酸，维生素，核酸等）的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长，成为营养缺陷型。营养缺陷型是一种生化突变株，它的出现是由基因突变引起的。抗性突变型：野生型菌株因发生基因突变，而产生的对某化学药物、致死物理因子或噬菌体的抗性变异类型。他们可在加有相应药物、用相应物理因子处理或含有噬菌体的培养基平板上选出。例如对一些抗生素具有抗药性的菌株等。细菌真菌和病毒基因突变的检测条件致死突变型：某菌株或病毒经基因突变后，在某种条件下可正常的生长繁殖并呈现其固有的类型，而

2、在另一种条件下却无法生长、繁殖，这种突变类型称为条件致死突变型。形态突变型：由突变引起的个体或菌落形态的变异，如细菌鞭毛或荚膜的有无，霉菌或放线菌的孢子有无或颜色变化，细菌产可溶性色素的变化、菌落表面的光滑、粗糙以及噬菌体的大小或清晰度等的变化。抗原突变型：由于基因突变引起的细胞抗原结构发生的变异类型。产量突变型：通过基因突变而产生的在代谢产物产量上明显有别于原始菌株的突变体，称产量突变型。营养缺陷型菌株法（Ames试验）鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，包括碱基置换突变型和移码突变型，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一

3、般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶，其中的酶能使一些前诱变剂转变为诱变剂，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。淘汰野生型法抗生素法青霉素可抑制细菌细胞壁的合成，是新分裂的细菌细胞不能合成新的细胞壁，这样分裂的细菌细胞就处于部分原生体状态。在培养基的低渗条件下就可能破裂死亡。经诱变处理的细菌在添加青霉素的基本培养基上培养几个周期，其大量生长的野生型细菌会因细胞分裂，新的细胞壁合成被青霉素抑制而处于原生体状

4、态，低渗破裂而死亡，而营养缺陷型因其生长营养物质自身不能合成，又不能在基本培养基中获得，因而并不发生分裂，青霉素也不能对其发挥作用。这样发而存活下来，经几个细胞周期后，收集菌体，再经完全培养及培养，负选择法筛选就可获得营养缺陷型突变。酵母菌用制霉素法：制霉素作用于真菌细胞膜上的甾醇，引起细胞膜的损伤，杀死生长繁殖过程的真菌，起到富集营养缺陷型的作用。菌丝过滤法真菌和放线菌等丝状菌的野生型孢子在基本培养基中能萌发长成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能萌发。把诱变处理后的孢子移入到基本培养液中，振荡培养10h左右，使野生型孢子萌发的菌丝刚刚肉眼可见，用灭菌的脱脂棉、滤

5、纸或玻璃漏斗除去菌丝。继续培养，每隔3~4h过滤一次，重复3-4次，最大限度地除去野生型细胞。然后稀释、涂皿分离。高温杀菌法利用芽孢杆菌类的芽孢和营养体对热敏感性的差异，让诱变后的细菌形成芽孢，然后把处在芽孢阶段的细菌移到基本培养液中，振荡培养一定时间，野生型芽孢萌发，而营养缺陷型芽孢不能萌发。此时将培养物加热到80℃，维持一定时间，野生型细胞大部分被杀死，缺陷型则得以保留，起到了浓缩作用。夹层培养法先在培养皿上倒一薄层基本培养基，凝固后再倒一层经过诱变处理的菌液，其上再浇一层基本培养基；经培养后，对首次出现的菌落用记号笔在皿底标记，然后再倒一层完全培养基，再

6、培养，出现的形态较小的新菌落，多为缺陷型。噬菌斑法利用宿主范围、生长速度、噬菌斑大小、形态等性状可对病毒进行突变的检测。大肠杆菌T4噬菌体快速溶菌γ突变体就可导致受体细胞快速裂解，形成大而透明的噬菌斑，根据在不同大肠杆菌品系中的表现，又可细分为γⅠ、γⅡ、γⅢ三种不同的突变体。有些病毒基因发生突变后不但可以改变其宿主范围、繁殖速度、毒性也可能发生改变。局限性转导温和噬菌体感染受体菌后，其染色体会整合到细菌染色体的特定位点上，从而使宿主细胞发生溶源化，例如λ噬菌体，其插入位点的二侧分别是gal和bio基因；如果该溶源菌因诱导而发生裂解时，在前噬菌体二侧的少数宿

7、主基因，（对λ噬菌体分别是gal和bio基因），会因偶尔发生的不正常切割而连在噬菌体DNA上，由此产生了一类特殊的噬菌体----缺陷噬菌体，缺陷噬菌体除含大部分自身的DNA外，缺失的基因被几个位于前噬菌体整合位点附近的宿主基因取代，这样形成的杂合DNA分子在宿主细胞内能够象正常的λ噬菌体DNA分子一样进行复制、包装，提供所需要的裂解功能，形成转导颗粒。但该缺陷噬菌体没有正常噬菌体的溶源性和增殖能力，感染受体细胞后，通过DNA整合进宿主染色体而形成稳定的转导子。果蝇突变体的检测CIB法果蝇有一个品系称ＣlＢ系,可以检测到X染色体上的任何致死突变或其他非致死突变，

8、Ｘ染色体上有一个大的倒位Ｃ；隐性致死突