hrm在水产领域中应用

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1、HRM在水产领域中的应用内容提示1高分辨熔解曲线(HRM)简介2HRM在水产领域中的应用3问题与展望HRM技术的发明HRM技术是由美国犹他大学保健科学中心病理学部CarlWittwer实验室与美国Idaho公司于2003年共同合作开发出来的新技术，并于2006成功生产出世界上第一台商品化的HRM仪器HR-1。LumingZhou什么是HRM？高分辨率熔解曲线（highresolutionmelting，HRM）是通过饱和染料监控核酸的熔解曲线变化进行分析的一种技术。它是在实时荧光PCR基础上发展起来的一种新的实时定量新技术。饱和荧光染料LCGreenplus——高分辨溶解曲线常用荧光染料

2、高分辨溶解曲线结果HRM分析流程PCR:在反应前加入LCGreen荧光染料时间大约2小时（包含试剂准备）在LightScanner上进行高分辨溶解曲线分析大约需要5-10分钟数据分析和处理大约需要5-10分钟如果需要，PCR产物可以直接进行下游的测序分析等大约需要30-60分钟2005LightScanner96/38496/384孔板~8分钟/板~2-6秒/样品温度均一性：0.15oC数据采集速度：大于100pts/秒升温速度：0.1oC/秒2010LS3232样品转盘,玻璃毛细管HRM检测60分钟内完成定量PCR和HRM检测HRM检测升温速度可以在0.05～0.90oC/秒之间调节

3、在升温速度小于≤0.3℃/秒时，温度均一性：±0.05oC数据采集速度：20pts/秒～400pts/秒（与升温速度有关）0.3oC/秒升温速度=67pts/℃0.05oC/秒升温速度=400pts/℃内容提示1高分辨熔解曲线(HRM)简介2HRM在水产领域中的应用3问题与展望1.基因突变扫描与基因分型SmithBL.等用小片段+内标探针和未标记探针，对箭鱼（Xiphiasgladius）种群的乳酸脱氢酶（ldh-A），肌球蛋白轻链-2（mlc-2），酸性核糖体磷蛋白P0（ARP）和钙调蛋白（CaM）中的核基因进行基因分型。结果表明，HRM是一个研究野生种群基因分型的强大工具。Smith

4、BL.,LuC.,BremerA.High-resolutionmeltinganalysis(HRMA):Ahighlysensitiveinexpensivegenotypingalternativeforpopulationstudies.MolecularEcologyResources,2010,10(1):193-196.2.品种鉴定HRM可以应用于微生物品种、物种快速鉴定以及动植物品种鉴定。McGlauflinMT.等利用高分辨率熔解曲线（HRM）发现了11个新的鉴别虹鳟和切喉鳟的SNPs。发现HRM能准确地识别DNA序列的核苷酸变化。McGlauflinMT.,Smith

5、MJ.,WangJT.,YoungSF.,ChenN.,LeeYC.High-resolutionmeltinganalysisforthediscoveryofnovelsingle-nucleotidepolymorphismsinrainbowandcutthroattroutforspeciesidentification.TransactionsoftheAmericanFisheriesSociety,2010,139(3):676-684.内容提示1高分辨熔解曲线(HRM)简介2HRM在水产领域中的应用3问题与展望HRM的缺陷对PCR反应、熔解仪器、荧光染料要求较高突变扫描

6、不能精确区分扩增片段中的不同杂合突变HRM对于大片断插入或缺失不敏感PCR扩增产物的长度受到限制展望高分辨率熔解曲线在基因分型、突变扫描与序列匹配研究中非常简便,近几年来在医学领域中发展迅速。饱和荧光染料的普及、未标记探针与实时定量PCR的结合,使得该技术无论在速度、灵敏度、准确性,还是在经济上都很符合检测要求。高分辨率熔解曲线技术不仅将在医学领域被广泛应用,还会广泛应用于动物基因检测、植物病理、微生物分型和食品安全检测等方面。相信将来也会广泛地应用到水产领域中。谢谢！