抗体制药第三章ppt课件

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1、第三章抗体制药第一节概述一、抗体的概念最早应用的预防和治疗传染病的抗体药物为抗毒素血清（1890，Behring）。1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白（丙种球蛋白），并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。因此，在相当一段时间内，丙种球蛋白成为抗体的同义词。1、抗体（Antibody，Ab）：指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。抗体产生的原因：机体免疫系统因病原菌、病毒感染，受抗原物质刺激后产生B淋巴细胞，被活化的B淋巴细胞

2、经增殖、分化产生浆细胞，浆细胞合成和分泌抗体。2、免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。所有的抗体均是Ig，但并非所有的Ig都是抗体。Ig是化学结构的概念，抗体是生物学功能的概念。3、多克隆抗体：针对多种抗原决定簇的抗体。由于病原菌含有多种抗原决定簇的抗原物质，由此刺激而产生的抗体制剂是多种抗体的混合物（其产量低，难以满足临床需要）。4、单克隆抗体（MonoclonalAntibody，McAb）：采用B淋巴细胞杂交瘤技术，由

3、纯一的单克隆细胞系产生的，针对一个抗原决定簇的，结构和特异性完全相同的高纯度抗体称单克隆抗体。特点：a、具有高度的特异性，均一性。b、来源稳定，可大量生产，为抗体制备和应用提供了全新的手段。二、临床实践中的作用1、用于疾病的诊断a、利用单克隆抗体检测与某些疾病相关的抗原，辅助临床诊断。b、用放射性标记的单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。2、McAb制剂用于疾病的治疗a、针对分化抗原CD3的单克隆抗体对器官移植排斥反应有显著的抑制效果。b、以McAb作为载体的导向药物可对肿瘤进行定向治疗。近

4、年来通过对McAb的改造，消除其鼠源性（免疫原性）并降低其分子量，只保留其同抗原特异性结合的活性，再用其制备导向药物用于肿瘤治疗，进而提高了免疫导向疗法的效果，使该领域得以迅速发展，目前成为抗体应用研究的热点。第二节单克隆抗体的制备单克隆抗体是将能产生抗体的B淋巴细胞与具有无限增殖能力的骨髓细胞进行原生质体融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。一、McAb制备的一般程序B淋巴细胞×骨髓瘤细胞↓融合杂交瘤细胞↓有限稀释↓克隆化纯一的单克隆细胞系↓McAb抗原矿物油

5、↓↓注射活鼠注射BalB/c小鼠刺激产生免疫反应诱发产生骨髓瘤细胞↓↓制备取鼠脾脏→B淋巴细胞×骨髓瘤细胞(HGPR缺陷)↓↓融合（PEG）制取B淋巴细胞分装多孔板选择性培（HAT）↓↓亲株死亡B淋巴细胞培养杂交瘤细胞生长繁殖↓↓有限稀释、克隆化制取多克隆抗体分离出单克隆细胞系→McAb二、McAb制备的基本技术（一）抗原的制备制备针对特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原。1、化学合成法制备高纯度的单一抗原在已知抗原的化学组成和结构的情况下进行。2、由病原菌、病毒或肿瘤细胞制备只能

6、得到部分纯化，甚至是极不纯的抗原混合物。3、用整个细胞或病毒为免疫原刺激动物细胞产生免疫反应动物产生免疫反应后取其B淋巴细胞，B淋巴细胞融合杂交后，再经筛选、克隆化，鉴别筛选出纯一的单克隆杂交瘤细胞系。（二）免疫动物品系的选择①多采用与骨髓瘤细胞供体相同品系的动物做为免疫动物。因种系距离越远，产生的杂交瘤越不稳定。常采用BalB/C小鼠和Lou大鼠。②应考虑所选动物对所用抗原能否产生良好的免疫应答，若不能，应改用其他品系的小鼠或大鼠。（三）动物免疫1、体内免疫法适用于抗原量多，免疫原性强的情况，

7、常用8~12周龄的雌性鼠。（1）颗粒性抗原（细胞抗原）免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔刺激动物免疫。①初次免疫，腹腔注射107个细胞。②3周后，追加免疫1~2次，腹腔注射1~5×106个在缓冲盐溶液中洗过的细胞。③融合前4~5天，静脉注射1~5×106个细胞。（2）可溶性抗原①按每只小鼠10~100µg抗原与福氏完全佐剂等量混合皮下注射。②3~4周后，100µg抗原在福氏完全佐剂中追加一次。③采集脾细胞前3天由静脉注射最后一次100µg抗原。因免疫后第3天B淋巴细胞的增殖率最高，是处于迅速分

8、裂期的细胞，有利于融合后增殖。福氏完全佐剂是由矿物油、乳化剂和杀死的分枝杆菌组成的油包水型的乳化佐剂，对于刺激细胞免疫和某些实验性免疫尤其有效。为促进B淋巴细胞转化，提高脾细胞分泌抗体的能力，可在注射抗原的同时加入细菌脂多糖。2、体外免疫（1）特点a、所用抗原量少（只需几µg），免疫期短，仅4~5天，干扰因素少。b、融合后产生的杂交瘤细胞不够稳定。适用于不能采用体内免疫法的情况，如制备人源性McAb；或者抗原的免疫原性极弱且能引起免疫抑制时使用。（2）基本方法①采用4~8周龄BaLB/C小鼠的脾