针药结合对乳腺增生大鼠血清及乳腺vegfbfgf含量的影响课件

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1、针药结合对乳腺增生大鼠血清及乳腺VEGF、bFGF的影响河北医科大学杜惠兰靳亚慈乳腺增生病育龄期妇女的常见病，多发病发病率占全部乳房疾病的74.1%，且有逐年上升的趋势患病人群乳腺癌发生率较普通人群高2～3倍因此,积极治疗乳腺增生病，对预防其发生癌变、提高妇女生活质量具有重要意义。目前，西医对本病尚缺乏令人满意的治疗措施，其内分泌疗法副作用较大，长期使用可干扰体内激素的平衡，不宜作为常规用药。乳腺增生病属于中医“乳中结核”、“乳疬”等范畴中医治疗乳腺增生病积累了大量的临床经验单纯服用中药单纯应用针灸如何进一步提高疗效，缩短疗程，成为研究重点中药和针灸作为中医学的两大疗法，

2、经曰：“汤药攻其内，针灸攻其外，则病无所逃矣”。两者各有长短，合用则相得益彰。乳腺增生病在病理方面除了表现在上皮细胞、间质细胞、腺泡、导管等组织的增生外，亦存在着血管的增生。目前血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生成因子（bFGF）被认为是乳腺癌特异性最强的两种血管因子。推测乳腺增生中血管的生成可能与VEGF和bFGF密切相关。因此，我们采用肌注外源性激素的方法复制乳腺增生大鼠模型，应用放免和免疫组织化学技术探讨乳腺增生病变与血清、乳腺VEGF和bFGF的关系以及针药协同作用对血清、乳腺VEGF和bFGF的调节治疗机制。材料与方法动物：清洁级雌性Wistar大鼠

3、60只，75~85日龄，220±20g由河北医科大学实验动物中心提供，合格证号：602089药物和试验试剂中药(柴胡、郁金、川楝子、王不留行、荔枝核、山慈菇等)采用传统煎煮方法，过滤，离心，浓缩制成水煎液，含生药2.75g/ml，密封分装，4℃放置备用苯甲酸雌二醇、黄体酮均由天津金耀氨基酸有限公司生产枸橼酸他莫昔芬（TAM）由上海医药集团有限公司华联制药厂生产VEGF和bFGF酶联免疫试剂盒，购于美国R-D公司。E2、P放免试剂盒购于美国DSL公司。PRL放免试剂盒购于天津九鼎医学生物工程有限公司。动物分组大鼠适应性喂养2周后，按随机数字表法将其分为6组，每组10只：正常

4、组模型组模型+针刺组（简称“针刺组”）模型+中药组（简称“中药组”）模型+针刺+中药组（简称“针药组”）模型+TAM阳性对照组（简称“对照组”）复制模型正常组大鼠常规喂养其余组参照张璐[2]等造模方法，大鼠腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg/日，连续25天，然后注射黄体酮5mg/kg/日，连续5天，建立大鼠乳腺增生模型。治疗方法从第31天开始，各组分别治疗:针刺组：根据《中国兽医针灸学》结合人体穴位，选取屋翳、合谷、膻中、足三里，每日1次，9次为一疗程，疗程间休息1天，共30日。中药组：按25g/kg/日灌服中药，30日。针药组：针刺操作同针刺组，同时灌服中药，剂量同中

5、药组，30日。对照组：三苯氧胺1.8mg/kg/日，相当于临床等效剂量，30日。正常组和模型组：灌服同体积蒸馏水，30日。标本制备和检测方法末次治疗5小时后，用游标卡尺测量第2对乳房的直径。断头取血，制备血清，置-70℃保存，用放免法测定血清E2、P和PRL含量，酶免法测定血清VEGF和bFGF含量。切取第2对乳房，甲醛固定，常规石蜡包埋切片，免疫组化染色。美国IPP分析软件对免疫组化染色切片进行图像分析，每个切片采集5个视野，得出度量物质含量信息的灰度等级，将所得灰度值取平均数作为统计指标。平均灰度与阳性表达强弱成反比，灰度值越小，阳性染色越强，蛋白表达越多。统计方法所

6、有数据用均数±标准差表示用SPSS12.0统计软件进行统计处理，对所测定结果进行正态性及方差齐性检验，组间比较用单因素方差分析检验以P＜0.05为有统计学意义动物一般状况正常组：大鼠毛色白而光泽，精神佳，反应灵敏，饮食、二便正常，乳房大小正常，色淡红，质软，用棉签触压时大鼠无明显的痛苦感。模型组：大鼠乳房乳头增大，色鲜红，质硬，用棉签触压时大鼠出现明显的痛苦感，易激惹。结果大鼠乳头直径的变化大鼠血清生殖激素的变化血清VEGF的变化血清bFGF的变化乳腺组织VEGF、bFGF的表达VEGF、bFGF的阳性表达定位于细胞浆内，为棕黄色染色。与正常组相比，模型组大鼠乳腺组织中V

7、EGF、bFGF的表达增强（P＜0.01）。治疗后，针刺组、中药组和针药组VEGF、bFGF的表达均明显低于模型组（均P＜0.01）；对照组与模型组比较有降低的趋势，但两组之间比较无统计学意义（P＞0.05）。针刺组VEGF表达正常组VEGF表达模型组VEGF表达中药组VEGF表达针药组VEGF表达对照组VEGF表达各组VEGF的表达正常组bFGF表达模型组bFGF表达中药组bFGF表达各组bFGF表达针刺组bFGF表达针药组bFGF表达对照组bFGF表达讨论乳腺增生大鼠模型的复制造模方法肌注外源性激素摘除双侧卵巢多数学者认为