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时间:2018-10-04
《高中生物选修3基础知识点归纳(经典)》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、.........................选修3《现代生物科技专题》知识点总结专题1 基因工程一、基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望,通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。又叫做DNA重组技术操作水平:DNA分子水平;优点:①定向改造生物性状(与诱变育种相比);②克服远缘杂交不亲和障碍(与杂交育种相比)二、基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶,不能切割RNA和单链DNA)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序
2、列(含4到8个核苷酸的回纹序列),并且使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性(3)结果:产生黏性末端或平末端。2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)分类:E·coliDNA连接酶(来源于大肠杆菌)和T4-DNA连接酶(来源于T4噬菌体)E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端;而T4DNA连接酶能连接两种末端,但连接平末端的效率较低(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到单链DNA片段的末端,合成子链。DNA连接酶是连接两个DNA片段(3)RNA聚合酶的作用部位:磷酸二酯键和氢键;解旋
3、酶的作用部位:氢键DNA连接酶、DNA聚合酶、限制酶、DNA(水解)酶的作用部位:磷酸二酯键3.“分子运输车”——载体(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存②具有一至多个限制酶切位点,便于目的基因的插入③具有标记基因,便于目的基因的鉴定和筛选*标记基因:合成荧光蛋白的基因或抗性基因(如抗青霉素基因)(2)最常用的载体是质粒,是细胞质中一种裸露的小型环状DNA,并具有自我复制能力(3)其它载体:λ噬菌体的衍生物、动植物病毒注意:1.目的基因:主要是指编码蛋白质的基因,也可以是一些具有调控作用的因子2.获得目的基因一般要切2个切口,产生4个黏性末端3.一般用同种限
4、制酶切割目的基因和质粒,以获得相同的黏性末端,利于重组质粒的构建(但可能导致目的基因自身环化)4.用两种限制酶同时切割目的基因和质粒,可防止目的基因和质粒自身环化(还可以防止目的基因反向连接)5.原核生物体内的限制酶不切割自身DNA的原因:原核生物的DNA中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰6.基因工程得以实现的理论基础:①不同生物的DNA分子结构基本相同;②所有生物共用一套遗传密码(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取(三种方法)1.从基因文库中获取:(1)分类:①基因组文库:含有某种生物的全部基因;②cDNA文库:含有某种生物的部分基因专业资料分享....
5、.....................(2)基因文库的构建过程:略(课本P10;注意两种文库的区别)2.PCR技术扩增目的基因(1)概念:短时间内在体外大量复制DNA的技术。(2)原理:DNA双链复制(3)条件:模板、Taq酶、引物(单链DNA片段,能与模板链互补配对)、4种脱氧核苷酸(4)过程:变性→退火→延伸3.通过DNA合成仪用化学方法人工合成:目的基因比较小,核苷酸序列已知第二步:基因表达载体的构建(核心步骤)1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在和表达,并且可以遗传给下一代2.组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因(+复制原点)(1)启动子(RNA聚合酶结合位
6、点):位于基因的首端,能驱动基因转录出mRNA(2)终止子:位于基因的尾端,终止转录①启动子和终止子位于DNA上;起始密码子和终止密码子位于mRNA上②真核生物的基因结构非编码区:不能转录出mRNA,但能调控基因的表达(含有启动子和终止子)基因外显子:转录出的mRNA能翻译出蛋白质编码区(原核生物的基因无外显子和内含子之分)(能转录形成mRNA)内含子:转录出的mRNA不能翻译出蛋白质(加工时被剪切)第三步:将目的基因导入受体细胞1.转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程2.常用的转化方法:①导入植物细胞:主要是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管
7、通道法等农杆菌能感染双子叶植物和裸子植物(植物受损伤时,伤口处细胞分泌大量酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞),农杆菌中Ti质粒的T-DNA能转移至受体细胞,并整合到受体细胞染色体的DNA上②导入动物细胞:最常用的方法:显微注射技术。受体细胞:受精卵③导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的优点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少最常用的原核细胞是大肠杆菌,方法:感受态法(Ca2+处理法,增强细胞壁的通透性)第四步:目的基因的检测与鉴定目的基因是否成功导入:DNA分子杂交技术(用到基因探针)
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