实验1-大肠杆菌的培养与分离

《实验1-大肠杆菌的培养与分离》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验1大肠杆菌的培养与分离第一部分:微生物的应用细菌的革兰氏染色(P23)革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌异养兼性厌氧菌细菌的外形与大小大肠杆菌属于杆状菌图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌二、培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培

2、养基。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途液体培养基：扩大培养固体培养基：分离、纯化2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、氧气、渗透压的要求．细菌喜荤，霉菌喜素细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。☆菌落液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长☆

3、无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。（１）消毒定义：三.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：3.常用的消毒与灭菌的方法是指利用化学或物理方法，杀灭大部分病原微生物的方法。是指利用化学或物理方法，杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法高压蒸汽灭菌灼烧灭菌干热灭菌灭菌方法：煮沸消毒法巴氏消毒法(70-75℃，保温30分钟)化学药剂消毒法（酒精、氯气等）紫外线消毒法消毒方法：培养基、无菌水、各种耐高温的玻璃金属器具需要保持干燥耐高温的玻璃金属器皿接种环等金属器具高压蒸

4、汽灭菌锅1kg/cm2、121℃下维持15min.三、消毒和灭菌彻底杀死部分杀死1、灼烧灭菌1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。思考实验用具LB固体培养基大肠杆菌菌液（LB液体培养基）培养皿接种环酒精棉酒精灯镊子、火柴、记号笔二、大肠杆菌的培养和分离实验操作（一）培养基的配制与

5、灭菌取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。LB液体培养基——细菌的扩大培养LB固体培养基——细菌的划线分离封口膜：既通气又不使菌进入（二）倒平板灭菌后的培养基在无菌操作台上，酒精灯火焰附近，倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面倒平板技术通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。60℃注意事项：1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤

6、风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌5.平板冷凝后，要将平板倒置,可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；若培养皿中已形成菌落，很难再形成单菌落，达不到分离目的。1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？3.在倒平板的过程中，如果不

7、小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（三）大肠杆菌的扩大培养将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。注意事项:1.火焰旁从斜面上用接种环取菌;2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌,冷却后方能取菌;3.取菌后封口膜和棉塞复原.（四）

8、大肠杆菌的分离分离方法:划线分离法和涂布分离法1、划线分离法无菌操作台上用接种环