油菜苗期菌核病抗性鉴定

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1、学习和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鉴定技术方法。一、目的实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行，鉴定周期短，不受自然环境影响，适于对大量材料的筛选。另据初步研究，苗期菌丝接种鉴定表现抗菌材料，在花期仍表现抗病。在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种鉴定法。二、内容说明（一）用品油菜不同品种种子（包括抗病品种如中油821，感病品种如84039的种子）、生长室、平底塑料盘（60×30×4cm）、园土、绿高一号液（北京北农绿高科技发展有限公司出产）、马铃薯、纱布、葡萄糖、琼脂胶、试管、三角瓶、解剖刀、接种环等。三、所需用品和操作方法（1）土壤准

2、备：取较肥沃的菜园土，清除石块，晒干敲碎，然后装入塑料盘中（需装满）。（二）、主要作法－－1.供试苗的种植（2）油菜播种：保证出苗后能保留生长一致苗30株。每10个品种设对照。（二）、主要作法－－1.供试苗的种植（3）土壤消毒：播种后用2000—3000倍的绿亨一号溶液浇透土壤进行消毒。（二）、主要作法－－1.供试苗的种植（4）播后管理：播后将塑料盘放于生长室内，在出苗期间，室内温度控制在20℃以下，在出真叶后，控制20—24℃左右，每2天喷水一次。（二）、主要作法－－1.供试苗的种植生长室生长室外管理（1）PDA培养基的制作：取马

3、铃薯200g，洗净去皮切碎，加水1000mL，煮沸30min，用纱布过滤，将滤液加水补足到1000mL，加葡萄糖10—20g和琼脂胶17—20g，加热溶化，用纱布过滤。然后依需要，分别装入试管（用作贮藏菌种），或装入培养皿（用作培养菌丝接种菌），然后在高压灭菌锅内进行灭菌。（二）、主要作法－－2.菌丝的培养（2）菌丝的培养：取贮存平板菌核病的菌丝，在无菌条件下移下装有PDA培养基的培养皿上，每皿一小块，放在培养皿中间，在22—25℃下培养3—4天，以菌丝长满，而又没有结核为宜。（二）、主要作法－－2.菌丝的培养（1）接种：待油菜苗3

4、—5片真叶时，将菌丝平板以无菌解剖刀切成0.5×0.5cm小块，将有菌丝的一面贴于叶片上（注意不要贴在叶脉上），每株接种1片叶，每叶接种1小块。见下图（二）、主要作法－－3.菌丝块的接种与管理（2）管理：接种后在23—26℃温度和85%—95%相对湿度下培养5—7天后即可调查（注意接种后前2天相对湿度应保持95%以上，以确保发病，后3—5天保持85%左右，使接种菌不致于腐烂）。（二）、主要作法－－3.菌丝块的接种与管理在试验中当感病品种的发病率超过40%以上方为有效鉴定。一般将病害等级分为5个等级，即：0级：无病。1级：病斑面积占接

5、种叶面积10%以下。2级：病斑面积占接种叶面积10—30%。3级：病斑面积占接种叶面积30—50%。4级：病斑面积占接种叶面积50%以上。（二）、主要作法－－4.病害等级调查（1）计算发病率（二）、主要作法－－5.统计方法和抗性分级标准（2）计算病情指数式中：Gi为病害级别；Ni为调查株数；i为0、1、2…k,GK为最高级别。（二）、主要作法－－5.统计方法和抗性分级标准（3）计算相对抗性指数（RRI）式中：m为供试材料；CK为对照。RRI，即Relativeresistantindex（二）、主要作法－－5.统计方法和抗性分级标准

6、（4）抗性分级标准：RRI≤-1.2≤-0.7<0≥0>0.9>2.0抗性分数高抗中抗低抗低感中感高感代号HRMRLRLSMSHS（二）、主要作法－－5.统计方法和抗性分级标准1、供试苗的种植、菌丝的培养和接种后管理中应如何掌握好温湿度条件？2、供试品种抗性属于哪个等级？3、你认为这种接种鉴定方法有何优缺点？四、作业