色谱分析方法的建立

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1、目录一、色谱分析方法的建立-综述1第一部分色谱法系统的选择与应用1第一章气相色谱法的特点1第二章高效液相色谱法的特点2第三章气相色谱和液相色谱的比较2第四章分析条件的确定3第五章样品的制备4第六章定量6第七章仪器选购的原则9二、小分子抗生素HPLC分析方法的建立102.样品介绍103.用到的色谱柱和色谱仪115.咨询月旭工程师后的思路116.同样流动相，两个色谱柱的比较127.确定色谱柱，进行流动相的优化128.峰纯度的检验13三、高效液相色谱流动相的选择15四、色谱分离基本原理16五．高效液相色谱分析（HPLC）

2、17§3.1高效液相色谱的特点17§3.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素17§3.3高效液相色谱的主要类型及其分离原理18六、色谱柱选择和流动相选择是色谱优化的关键19七、复杂药物样品分析方法建立的手段211材料和方法221.1色谱法221.2试剂和材料22322实验部分222.1反相色谱法232.2样品分析242.3标准曲线24八、薄层色谱法251、基本原理262、比移值263、仪器与材料26九、薄层板制备271、点样272、展开273、显色284、测定比移值295、薄层扫描29十、过柱291、柱子分类292、柱

3、子的尺寸293、关于无水无氧柱304、关于湿法、干法上样305、溶剂的选择306、关于操作问题31●装柱31●加样31●淋洗剂的选择31●样品的收集31●最后的处理3132一、色谱分析方法的建立-综述第一部分色谱法系统的选择与应用第一章气相色谱法的特点1，色谱柱内现象单纯，可以从理论上理解。2，若用非极性柱，组分按沸点顺序流出。因此，在分配气相色谱法中，若已知化合物，则可预测流出顺序。3，能较容易地制备具有高分离能力的色谱柱，并可在较长时间内保持稳定的性能。4，因为移动相是气体，其粘度小，所以增加色谱柱长度可改善分

4、离能力。5，样品组分在固定相和移动相中易扩散，能迅速达到分配平衡，故可提高移动相的流速以缩短分析时间。6，检测惰性气体中的样品组分时，可以使用各种高灵敏检测器，所以能做极微量分析和特定组分的高灵敏度的选择性检测。7，使用通用型检测器时，可以预测注入样品在多大程度上能作为色谱峰流出并被检测，所以分析的可信度高。在不要求精度时，也可以把峰面积百分数近似作为组成百分数，进行快速定量分析。8，容易与质谱仪或付里叶变换红外光谱仪联用，便于多组分混合物的分离和鉴定。9，适于分析的物质仅限于在某种形式下为热稳定的挥发性物质。所以

5、从全部化合物来看，适用范围较窄，约为20%。10，用选择性检测器做微量分析时，样品必须经过前处理以除去干扰组分。第二章高效液相色谱法的特点1，适用样品范围广，80%的分析对象可借此法分析。2，为进行分离，可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化。如果熟悉液相色谱，这是非常有利的，但对初学者来说，这是困难的。3，可以使用高效的分离柱，易于分离复杂的多组分混合物。4，把被分离的组分溶解在流动相中，可以全部回收之。5，可以使用多种非破坏性高灵敏度和选择性的检测器，把几种检测器串联起来，根据其对应特性，获取与定性有关

6、的重要信息。6，只能检测从色谱柱流出的组分。7，由于没有通用型高灵敏度检测器，所以在分析未知混合物而没有色谱峰的时候，无法确定其原因是分离条件不合适，还是检测器没有响应。8，采用尺寸排斥色谱法时，从低分子到高分子的样品全部流出，而且流出顺序是从高分子量开始，故可根据保留容量推测分子量，最适于做未知样品的组成分析。9，测定精度好。因为注入精度比气相色谱好，故可以用绝对工作曲线。10，虽然示差折光检测器为通用型检测器，但和气相色谱的热导检测器和氢火焰检测器相比，由于化合物之间的响应不同，所以用峰面积百分数求由多种化合物

7、组成的混合物时问题较多。1132，要限制色谱柱的使用条件（温度、压力、流动相等）。而且与气相色谱相比，性能随时间的变化较大。必须定期用标准品在标准条件下检查色谱柱的性能。若按照不同的样品对象，固定使用色谱柱，对色谱柱的寿命是有利的。12，制作色谱柱需要特殊装置和专门技能。13，柱外死体积对色谱柱的性能有重大的综合性影响，而且连接方法依仪器制造厂而异。14，与气相色谱法相比，由于共存物质对分离的影响小，易于制备分析样品。第三章气相色谱和液相色谱的比较1，流动相GC中用气体作流动相，又叫载气。常用的载气有氦气、氮气和氢

8、气。与HPLC相比，GC流动相的种类少，可选择范围小，载气的主要作用是将样品带入GC系统进行分离，其本身对分离结果的影响很有限。而在HPLC中流动相种类多，且对分离结果的贡献很大。换一个角度看，GC的操作参数优化相对HPLC要简单一些。此外，GC载气的成本要低于HPLC流动相的成本。2、固定相因为GC的载气种类相对少，故其分离选择性主要通过不同的固定相来改变