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时间:2018-10-02
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1、目录一、色谱分析方法的建立-综述1第一部分色谱法系统的选择与应用1第一章气相色谱法的特点1第二章高效液相色谱法的特点2第三章气相色谱和液相色谱的比较2第四章分析条件的确定3第五章样品的制备4第六章定量6第七章仪器选购的原则9二、小分子抗生素HPLC分析方法的建立102.样品介绍103.用到的色谱柱和色谱仪115.咨询月旭工程师后的思路116.同样流动相,两个色谱柱的比较127.确定色谱柱,进行流动相的优化128.峰纯度的检验13三、高效液相色谱流动相的选择15四、色谱分离基本原理16五.高效液相色谱分析(HPLC)
2、17§3.1高效液相色谱的特点17§3.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素17§3.3高效液相色谱的主要类型及其分离原理18六、色谱柱选择和流动相选择是色谱优化的关键19七、复杂药物样品分析方法建立的手段211材料和方法221.1色谱法221.2试剂和材料22322实验部分222.1反相色谱法232.2样品分析242.3标准曲线24八、薄层色谱法251、基本原理262、比移值263、仪器与材料26九、薄层板制备271、点样272、展开273、显色284、测定比移值295、薄层扫描29十、过柱291、柱子分类292、柱
3、子的尺寸293、关于无水无氧柱304、关于湿法、干法上样305、溶剂的选择306、关于操作问题31●装柱31●加样31●淋洗剂的选择31●样品的收集31●最后的处理3132一、色谱分析方法的建立-综述第一部分色谱法系统的选择与应用第一章气相色谱法的特点1,色谱柱内现象单纯,可以从理论上理解。2,若用非极性柱,组分按沸点顺序流出。因此,在分配气相色谱法中,若已知化合物,则可预测流出顺序。3,能较容易地制备具有高分离能力的色谱柱,并可在较长时间内保持稳定的性能。4,因为移动相是气体,其粘度小,所以增加色谱柱长度可改善分
4、离能力。5,样品组分在固定相和移动相中易扩散,能迅速达到分配平衡,故可提高移动相的流速以缩短分析时间。6,检测惰性气体中的样品组分时,可以使用各种高灵敏检测器,所以能做极微量分析和特定组分的高灵敏度的选择性检测。7,使用通用型检测器时,可以预测注入样品在多大程度上能作为色谱峰流出并被检测,所以分析的可信度高。在不要求精度时,也可以把峰面积百分数近似作为组成百分数,进行快速定量分析。8,容易与质谱仪或付里叶变换红外光谱仪联用,便于多组分混合物的分离和鉴定。9,适于分析的物质仅限于在某种形式下为热稳定的挥发性物质。所以
5、从全部化合物来看,适用范围较窄,约为20%。10,用选择性检测器做微量分析时,样品必须经过前处理以除去干扰组分。第二章高效液相色谱法的特点1,适用样品范围广,80%的分析对象可借此法分析。2,为进行分离,可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化。如果熟悉液相色谱,这是非常有利的,但对初学者来说,这是困难的。3,可以使用高效的分离柱,易于分离复杂的多组分混合物。4,把被分离的组分溶解在流动相中,可以全部回收之。5,可以使用多种非破坏性高灵敏度和选择性的检测器,把几种检测器串联起来,根据其对应特性,获取与定性有关
6、的重要信息。6,只能检测从色谱柱流出的组分。7,由于没有通用型高灵敏度检测器,所以在分析未知混合物而没有色谱峰的时候,无法确定其原因是分离条件不合适,还是检测器没有响应。8,采用尺寸排斥色谱法时,从低分子到高分子的样品全部流出,而且流出顺序是从高分子量开始,故可根据保留容量推测分子量,最适于做未知样品的组成分析。9,测定精度好。因为注入精度比气相色谱好,故可以用绝对工作曲线。10,虽然示差折光检测器为通用型检测器,但和气相色谱的热导检测器和氢火焰检测器相比,由于化合物之间的响应不同,所以用峰面积百分数求由多种化合物
7、组成的混合物时问题较多。1132,要限制色谱柱的使用条件(温度、压力、流动相等)。而且与气相色谱相比,性能随时间的变化较大。必须定期用标准品在标准条件下检查色谱柱的性能。若按照不同的样品对象,固定使用色谱柱,对色谱柱的寿命是有利的。12,制作色谱柱需要特殊装置和专门技能。13,柱外死体积对色谱柱的性能有重大的综合性影响,而且连接方法依仪器制造厂而异。14,与气相色谱法相比,由于共存物质对分离的影响小,易于制备分析样品。第三章气相色谱和液相色谱的比较1,流动相GC中用气体作流动相,又叫载气。常用的载气有氦气、氮气和氢
8、气。与HPLC相比,GC流动相的种类少,可选择范围小,载气的主要作用是将样品带入GC系统进行分离,其本身对分离结果的影响很有限。而在HPLC中流动相种类多,且对分离结果的贡献很大。换一个角度看,GC的操作参数优化相对HPLC要简单一些。此外,GC载气的成本要低于HPLC流动相的成本。2、固定相因为GC的载气种类相对少,故其分离选择性主要通过不同的固定相来改变
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