微生物的利用-大肠杆菌的培养与分离ppt课件

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1、微生物的利用1大肠杆菌的培养和分离2分离以尿素为氮源的微生物大肠杆菌的培养和分离实验目的实验原理实验器具与材料实验步骤实验结果和结论知识拓展实验目的利用LB液体培养基进行大肠杆菌的扩增培养的操作利用LB固体平面培养基划线培养进行大肠杆菌的分离说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理实验原理培养基大肠杆菌LB液体培养基和LB固体培养基划线分离法菌种的低温保存无菌技术培养基一、培养基定义及营养成分1、定义人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质，称为培养基。2、营养成分培养基中的营养物质包括

2、水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等2、营养成分①碳源为微生物提供碳元素的物质，可分为有机碳源和无机碳源。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源，异养微生物只能利用有机碳源；单质碳不能作为碳源。注意：碳源&能源的辨析2、营养成分②氮源为微生物提供氮元素的物质，可分为有机氮源和无机氮源。有机氮源包括牛肉膏，蛋白胨等，无机氮源包括N2、NH3、NH4+、NO3-等，只有固氮微生物才能利用N2。营养物质来源主要成分牛肉膏瘦牛肉组织漫出汁浓缩而成的膏状物质富含水溶性糖类，有机氨化合物，维生素，

3、无机盐等蛋白胨将肉，明胶，用酸或者蛋白酶水解后干燥而成富含有机氮化合物，也有一些维生素，和糖类粉末状物质2、营养成分③生长因子通常指那些微生物生长所必需而且需要量很小，自身不能合成或合成量不足机体生长需要的有机化合物。一般可分为维生素、氨基酸、嘌呤与嘧啶这三类。2、营养成分④无机盐无机盐是微生物生长、代谢必不可少的一类营养物质。无机盐生理功能主要是：作为酶活性中心的组成部分；构成微生物细胞的各种组分；调节并维持细胞的渗透压平衡、调节pH和控制细胞的氧化还原位；作为某些微生物生长的能源物质。常见种类：磷酸盐、硫

4、酸盐、氯化物，以及含有钠、钾、钙、镁、铁等金属元素的化合物。2、营养成分注意：①这几类营养成分不一定都需要一一单独添加。②不是所有培养基都必须同时含有碳源、氮源、水、无机盐、生长因子。二、培养基的类型1、按照物理性质划分液体培养基，固体培养基，半固体培养基2、按照成分划分天然培养基，合成培养基3、按照用途划分基础培养基，加富培养基，选择培养基，鉴别培养基a.液体培养基：不加凝固剂，配置成液体状态。应用：在用液体培养基培养微生物时，通过振荡或搅拌可以增加培养基的通气量，同时使营养物质分布均匀。液体培养基常用于大

5、规模工业生产，以及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究。b.固体培养基：加入较多凝固剂，配置成固体状态,主要用于获取单菌落，并对微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏等。常用的凝固剂有琼脂、明胶、和硅胶。绝大多数微生物而言，琼脂是最理想的凝固剂，由藻类(海产石花菜)中提取的一种复杂多糖；明胶是由胶原蛋白制备得到的产物，是最早用来作为凝固剂的物质；硅胶是由无机的硅酸钠等制成的胶体。c.半固体培养基：加入较少凝固剂，培养基中琼脂含量一般为0.2％—0.7%。应用：可用于观察微生物的运动特征、分类鉴定等。1

6、、按照物理性质划分考点：注意固体&液体培养基的判断关键字：液体培养基：振荡、大规模工业生产等固体培养基：凝固剂、平板、单菌落等天然培养基：这类培养基含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物，也称非化学限定培养基。（因为天然有机物成分是十分混杂不稳定的。）牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。基因克隆技术中常用的LB(Luria—Bertani)培养基也是一种天然培养基。常用的天然有机营养物质包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡萝卜汁、

7、椰子汁等，嗜粪微生物可以利用粪水作为营养物质。应用：天然培养基成本较低，除在实验室经常使用外，也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。合成培养基：是由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也称化学限定培养基。高氏I号培养基和查氏培养基就属于此种类型。应用：配制合成培养基时重复性强，但与天然培养基相比其成本较高，微生物在其中生长速度较慢，一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。①基础培养基：含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基

8、，如牛肉膏蛋白胨培养基。应用：基础培养基可以用来作为一些特殊培养基的基础成分。②加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基，用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物。这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等。应用：加富培养基可以用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物，以及从环境中富集和分离某种微生物。③鉴别培养基：是用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基