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1、蛋白质与蛋白质的相互作用研究方法蛋白质与DNA相互作用研究方法蛋白质与蛋白质的相互作用的研究方法酵母双杂交系统YeastTwo-HybridSysterm免疫共沉淀Co-immunoprecipitation(Co-IP)GSTpull-down技术荧光共振能量转移FluorescentResonantEnergyTransfer（FRET）双分子荧光互补（BimolecularFluorescentComplement）BIFC蛋白质芯片技术其它方法酵母双杂交系统1.1酵母双杂交技术的原理酵母双杂交系统由
2、Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。他的产生是基于对酵母转录因子GAL4性质的研究.基因转录不仅需要有特定的DNA顺式序列结构，而且也需要有反式转录激活因子的参与。转录激活因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成,其中有DNA结合结构域(DNAbindingdomain,DB)和转录激活结构域(activationdomain,AD),它们都是转录激活因子发挥功能所必需的。单独的BD或AD都不能激活基因转录，但不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。
3、如果要研究两个蛋白之间有无相互作用，可以把这两个蛋白分别与DB和AD形成的融合蛋白。与DB融合的蛋白称为“诱饵”(bait)，与AD融合的蛋白称为“猎物”(prey)。如果这两个蛋白能发生相互作用,这两个融合蛋白上的DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子,从而激活报告基因(reportergene)的转录与表达。通过检测报告基因的表达产物,可判别“诱饵”和“猎物”这两个蛋白质之间是否存在相互作用。1.1酵母双杂交技术的原理同时将上述两种载体转化改造后的酵母，这种改造后的酵母细胞的基因组中既不能产生GAL
4、4，又不能合成LEU、TRP、HIS、ADE，因此，酵母在缺乏这些营养的培养基上无法正常生长。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。1.2酵母双杂交操作主要流程1.分别构建BD和AD融合蛋白载体2.分别将重组载体转化酵母菌细胞3.对酵母转化子进行自激活检测4.将重组载体共转化酵母菌细胞5.检测报告基因表达产物6.分析酵母双杂交实验结果BDADBDADBDADxYIdent
5、ificationandCharacterizationofFAM124BasaNovelComponentofaCHD7andCHD8ContainingComplex实例Method：ForyeasttwohybridstudieswegeneratedtheconstructsFAM124B-1,3-pGADT7(transcriptvariant1)andFAM124B-1,2-pGADT7(transcriptvariant2)FAM124B-1,3-pGBKT7(transcriptvarian
6、t1,FAM124B-1,2-pGBKT7(transcriptvariant),Thesebothplasmidswereco-transformedintoY2HGoldstraincellstogetherwitheithertheCHD7-CR1-3-pGBKT7(aminoacids1591-2181)ortheCHD8-pGBKT7(aminoacids1789–2302)plasmids.TserendulamBatsukh,YvonneSchulz,et.al.Identificationa
7、ndCharacterizationofFAM124BasaNovelComponentofaCHD7andCHD8ContainingComplex.PLoSOne.2012;7(12):e52640Yeasttwohybridassay.DirectyeasttwohybridexperimentwiththeconstructsFAM124B-1,3-pGADT7(fulllengthtranscriptvariant1)andCHD7-CR1-3-pGBKT7(aminoacids1591-2181
8、,demonstratingnodirectinteractionbetweenFAM124Btranscriptvariant1andtheCHD7part,while(B)DirectyeasttwohybridexperimentwiththeconstructsFAM124B-1,3-pGADT7(fulllengthtranscriptvariant1)andCHD8-pGBKT7(aminoacids
