赤芝子实体的化学成分及细胞毒活性的研究

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1、赤芝子实体的化学成分及细胞毒活性的研究作者：满淑丽高文远颜璐璐张萱【摘要】目的对赤芝子实体进行化学成分研究，并对单体化合物进行细胞毒活性测定。方法利用硅胶柱层析，SephadexLH-20柱色谱以及HPLC等手段分离纯化得到单体化合物，并进行结构鉴定，通过MTT法对其进行细胞毒活性测定。结果从赤芝子实体中分离并鉴定了3个单体化合物的结构，分别是灵芝醇B，麦角甾醇和过氧化麦角甾醇，这3个化合物对小鼠肺腺癌LA795细胞的IC50分别为，，μg/ml。结论3种化合物皆有细胞毒活性，其中以麦角甾醇为最好。【关键词】灵芝分离鉴定细胞毒活性赤芝Ganodermalucidum(Fr.)Ka

2、rst系担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，具有补中益气、滋外强壮、扶正固本、延年益寿等功效，被列为名贵药材。20世纪70年代以来，我国学者在中西医结合的学术思想指导下，运用现代医药生物技术先后对多种灵芝属真菌的子实体、菌丝体、孢子粉及发酵液的提取物或有效成分进行了系统的化学、药理学研究，对灵芝扶正固本作用的机理进行了有益的探索［1］。近年来，灵芝有效成分的分析及药理作用，临床应用等的研究已经引起国际上的关注。为了进一步研究其活性成分，本实验对赤芝子实体进行提取分离，得到3个化合物，经鉴定其结构分别为灵芝醇B，麦角甾醇和过氧化麦角甾醇，其体外抗肿瘤活性作用研究表明对小鼠肺腺癌LA795细

3、胞具有细胞毒活性。1仪器与材料GulliverSeries高效液相色谱仪(日本JASCO公司)；核磁共振谱仪(VARIANINOVA00MHz)；TECANA-500Spectra型酶标仪(奥地利)。实验用硅胶(青岛海洋化工)；SephadexLH-20(AmershamPharmaciaBiotech)；RPMI1640培养基(Gibco公司)；胎牛血清(天津市庆星科技有限公司)；噻唑蓝(MTT，Sigma公司)；二甲基亚砜(DMSO，Sigma公司)。赤芝Ganodermalucidum(Fr.)Kart，由天津中新药业提供，经天津大学药物科学与技术学院高文远教授鉴定，植物标

4、本现存于天津大学药物科学与技术学院天然药物学实验室。小鼠肺腺癌LA795细胞株，由中国协和医科大学基础医学研究所提供。提取分离将赤芝药材粉碎，用95%的乙醇加热回流提取5h，过滤，滤渣再用10倍量95%乙醇加热回流提取，如此提取5次，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，得提取物250g。将浸膏混悬水溶液分别用石油醚，醋酸乙酯，正丁醇萃取。其中石油醚层部分30g，干法上样，采用石油醚－醋酸乙酯溶剂系统6个梯度洗脱，共收集得到12个组份，从其第10个组分中经过硅胶层析分离得到化合物Ⅰ。醋酸乙酯层部分40g以CHCl3-MeOH梯度洗脱，共得到16个组分，对其第2个组分进行重结晶得到化合物Ⅱ，

5、剩余部分经过凝胶柱层析和正相HPLC分离，得到化合物Ⅲ。结构鉴定化合物Ⅰ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH：(1H，d，J=6Hz，7-H)，.32(1H，d，J=，11-H)，(1H，t，J=7Hz，24-H)，(1H，dd，J=，)，(2H，s，26-H)，(3H，s，27-H)，(3H，s，29-H)，(3H，s，30-H)，(3H，d，J=，21-H)，(3H，s，28-H)，(3H，s，19-H)，(3H，s，18-H)。13CNMR数据见表1，以上数据与文献报道［2］的灵芝醇B相符。化合物Ⅱ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH:(

6、1H，d，6-H)，.384(1H，d，7-H)，(1H，m，22-H)，(1H，m，23-H)，(1H，m，3-H)，(3H，d，21-H)，(3H，s，19-H)，(3H，d，25-H)，(3H，d，27H)，(3H，d，28H)，(3H，s，18-H)。以上数据与文献报道的麦角甾醇［3］相符。分别以氯仿/甲醇(98:2，V/V)，石油醚/乙酸乙酯(1:4，V/V)做层析液，用麦角甾醇标准品作TLC对照，Rf值相同。因此确定为同一化合物。化合物Ⅲ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH:(1H，d，J=，6-H)，(1H，d，J=，7-H)，(1H，dd，J=1

7、5，，23-H)，(1H，dd，J=15，8，22-H)，(1H，m，3-H)，(3H，d，J=，21-H)，(3H，s，19-H)，(3H，d，J=，26-H)，(3H，d，J=，27H)，(3H，d，J=，28H)，(3H，s，18-H)。13CNMR数据见表1，以上数据与文献报道［4］的麦角甾醇过氧化物相符。表1化合物Ⅰ、Ⅲ的13CNMR光谱数据细胞毒活性测定.1细胞培养小鼠肺腺癌LA795细胞株，为贴壁细胞，培养于含10%灭活胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/m