本微生物感染的检查法第7章

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1、1第7章细菌与病毒的微生物学检查法p83病原生物学与免疫学教研室潘凤兰副教授联系方式：81487384(o)2病例分析某女50岁，咳嗽发烧（39℃）入院，诊断为细菌感性气管炎，青霉素常规治疗3天病情未有好转，后根据检验报告改用红霉素治疗，2天病情明显好转，5天后病人康复出院。检验科对病人做了什么检验？3一实验室诊断方法:1显微镜2分离培养3免疫学技术4分子生物学方法4二标本采集与送检原则1无菌操作2选择感染部位、病变明显部位3最佳时间、适宜标本4细菌：使用抗生素前病毒：应加入抗生素5查抗体：急性期恢

2、复期升高4倍6及时送检：病毒标本加入含抗生素的50%甘油缓冲盐水液中冷藏速送5第一节细菌感染的微生物检查法一细菌学诊断（一）形态学检查EscherichiacoliStaphylococcusaureus7（三）生化试验8（四）血清鉴定抗原+抗体9（五）动物实验1、常用动物豚鼠102接种途径3内毒素检测：鲎试验11（六）毒力检测体内：LD50ID50体外：Elek平板12（七）药物敏感试验纸碟法、试管法13二检测病原菌成分（一）抗原检测1原理：用已知的特异性抗体，检测未知的细菌抗原成分。2方法：凝集试

3、验沉淀试验免疫标记技术14（二）核酸的检测1核酸杂交技术（1）原理（2）种类：Southern印迹杂交（Southernblot）Northern印迹杂交（Northernblot）斑点杂交原位杂交（3）优点：快速、敏感（0.05pg/l）、特异152、聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）体外DNA扩增技术（106），在DNA扩增仪上进行适用于难以培养的细菌引起的疾病如结核、慢性淋病、梅毒等优点：快速、敏感（pg/l）、特异16三抗体的检测（血清学诊断）1、取急性

4、期、恢复期双份血清，升高4倍2、常用方法凝集试验、沉淀试验、免疫标记技术17第7章第二节p88病毒感染的微生物学检查法18病毒实验室检查内容病毒的形态学检查病毒分离培养的方法病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标病毒的成分检测病毒抗体的检测19病毒体的形态学检测Morphology1.光学显微镜：细胞病变：包涵体，多核巨细胞2.电镜检查：直接电镜法免疫电镜法20轮状病毒负染的电镜照片21动物接种:利用已知或建立新动物模型鸡胚接种:适用多种病毒接种组织培养:器官培养,组织培养,细胞培养细胞培养:*原代细胞系（2

5、～3代）*二倍体细胞系（40～50代）*传代细胞系（HenriettaLackscells-HeLacells）病毒分离培养的方法22绒毛尿囊膜接种痘病毒单纯疱疹病毒卵黄囊接种嗜神经病毒羊膜腔接种流感病毒初次分离尿囊腔接种流感病毒腮腺炎病毒气室23病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标细胞病变：CPE2.红细胞吸附（hemadsorption）3.红细胞凝集（hemagglutination）4.病毒干扰作用（viralinterference）5.中和试验（neutralizationtest）6.空斑形成

6、试验（plaqueformation）24细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)多数病毒在细胞内增殖,可引起细胞形态学改变。细胞圆缩、溶解、脱落甚至死亡形成多核巨细胞在细胞核或浆内形成包涵体25正常细胞病变细胞26redbloodcell红细胞吸附virus+susceptiblecells+viralproteinsexpressedonthecellmembrane27redbloodcell红细胞凝集virus+susceptiblecells+virusesreleasedf

7、romthecells28病毒干扰作用某些病毒感染细胞后，不产生CPE及其它变化，但却能阻止后一种病毒在该细胞内的增殖。通过此现象可测出一些不引起CPE、血凝或血吸现象的病毒。29YYY+virusknownantiserumCPE?……virusblockedsusceptiblecellsYYYYYYYY+中和试验30空斑plaque由病毒感染细胞后在培养瓶的琼脂层上形成的一个坏死病灶空斑形成单位PFU(plaqueformationunit)一个病毒感染细胞形成的空斑31免疫荧光技术(IFA)酶

8、免疫技术(EIA)四、病毒成分检测（一）病毒抗原检测32EnzymeImmunoAssay(EIA)AgAb331、核酸杂交dotblothybridizationSouthernblothybridizationNorthernblothybridizationinsituhybridization2、聚合酶链反应PCR核酸扩增（二）病毒核酸的检测34五、病毒抗体的检测（血清学诊断）方法：红细胞凝集抑制试验酶联免疫吸附试验抗体效价+病人血清（未知抗体）