检验医学专业实验iii重点整理 临床免疫学检验部分

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1、临床免疫学检验部分抗血清的制备【原理】：用抗原刺激机体可以产生抗体，抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得的抗体的的特异性和效价。在体外有目的的制备抗原，经初次、再次免疫的过程可以获得高质量的抗体。【注意事项】①制备佐剂时，一定要顺着同一方向用劲磨。②检查油包水的方法：培养皿内加水，滴入混匀液，不散开即可。如果第1次检查不合格，第2次检查必须重新倒水在平皿。③免疫动物皮内注射时，可以在足垫、腋下、背部等处多点注射，总剂量1ml/只。 凝集反应颗粒性Ag或可溶性Ag（Ab）与载体颗粒结合成的致敏颗粒，与相

2、应Ab（Ag）发生特异性反应。在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。一、直接凝集反应：颗粒性Ag，与相应Ab直接结合。在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。（1）玻片法凝集反应：【原理】：颗粒性Ag（细菌、红细胞等），与相应Ab直接结合。在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。【意义】：①定性试验，可用已知抗体的诊断血清来测未知的抗原。②可用于细菌分型、ABO血型鉴定等。【结果观察】：①对照区不发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。②试验区，伤寒菌液（Ag）与相应的Ab发生反应，出现肉眼可见的凝集块，为阳性。如与对照

3、相同则为阴性。（2）试管法凝集反应：【原理】：用已知细菌作为一定浓度的悬液Ag，与一系列稀释的受检血清混合，经静置保温后观察每管内颗粒性Ag的凝集程度。【结果观察】：①先看对照管，应无凝集现象，轻摇试管，细菌分散均匀，混浊。再从第1管开始看。②根据凝集度打“+”。—：管底无沉淀,液体混浊，细菌分散均匀。++++：管底有沉淀,上液澄清，细菌全部凝集。+++：管底有沉淀,液体稍混,细菌1/4不凝集。++:管底有沉淀,液体混浊，细菌1/2不凝集+:管底仅少量有沉淀,液体混浊。效价判断：以出现“++”凝集的最大稀释

4、度，为该血清的凝集效价。二、间接凝集反应：必须借助颗粒性载体，将可溶性Ag（Ab）致敏载体，成致敏颗粒，再检测标本中相应的Ab（Ag）。间接凝集反应（胶乳凝集抑制试验）：【定义】：间接凝集反应：将可溶性Ag挂在一个无关免疫的载体(聚苯乙烯胶乳)上，制备成颗粒Ag,与其相应的Ab相结合,为间接凝集反应。以检测尿中HCG为例：阳性：尿含HCG+抗HCG→ +HCG胶乳颗粒→ 不凝集阴性：尿不含HCG+抗HCG→ +HCG胶乳颗粒→ 凝集沉淀反应【定义】：可溶性Ag+相应Ab→ 形成肉眼可见的沉淀物质（Ag-Ab

5、复合物）一、对流免疫电泳【原理】：利用电场的作用加强和加快双向扩散的一种方法。在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中进行电泳，带有较多负电荷的Ag泳向阳极，而Ab球蛋白等电点偏高（约为6--7），在pH8.6时带负电荷较少，加上分子量较大，泳动慢，受电渗（指电场中液体对固体支持物的相对移动）干扰后向阴极倒退，这样抗原抗体作相对运动，在较短时间内即可相遇，在孔间两者分子比例合适的地方形成沉淀线。【意义】： 对流免疫电泳主要用于检测标本中的抗原如AFP、HBsAg等。本法较双向琼脂扩散时间大为缩短（一般只需30分钟到1

6、小时），且灵敏度比双扩高约数十倍。沉淀线的位置与Ag、Ab分子电荷情况有关，也与Ag、Ab比例有关。有沉淀线为阳性，无沉淀线为阴性。【特点】优点：操作简便，观察结果快，敏感度比双扩高8-16倍。缺点：分辨率差，当有多种Ag、Ab系统存在时，形成的沉淀线位置易重叠，难以分辨，所以用此目的时，不如双扩。 二、双向琼脂扩散实验【原理】：定性试验。将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上相对应的孔内，抗原抗体从孔内向四周扩散，在两者对应比例适宜处形成沉淀线。【意义】：可用已知抗原（抗体）来检测未知的抗体（抗原），同时

7、检测抗原抗体的纯度。临床上常用来检测甲胎蛋白（AFP），作为原发性肝癌等的辅助诊断。【结果判断】：①在阳性对照孔与中间的抗体孔之间出现一条或多条白色沉淀线（一对抗原抗体系统即可出现一条沉淀线，如有多对抗原抗体可出现多条沉淀线）。②观察标本孔与中间的抗体孔之间有无出现沉淀线，有即为阳性，无即为阴性。以上两实验的注意事项：①浇琼脂板时注意动作要迅速，琼脂不要溢出玻片，成品琼脂板平整无气泡，打孔时，不要将琼脂划破；②加样时，不要溢出孔外；③加样用的枪头不要混用。三、免疫电泳【原理】：区带电泳后进行双相琼脂扩散实验

8、。将待测标本置于琼脂凝胶中电泳，样品中各蛋白成分因分子量及电泳迁移率不同，被分成肉眼不可见的若干区带。电泳结束后，沿与电泳方向平行的两侧开槽并加入抗血清，置室温或37度使两者扩散。18-24h后，各区带蛋白与相应的Ab在相应的位置上形成弧形沉淀线。Ag越多，沉淀线越靠近Ab槽，其沉淀线越粗，可做细微的蛋白质组分分析，仅为定性实验。【用途】：定性实验，主要用于纯化Ag和Ab成分的分析及正常和异常免疫球蛋白的识别和鉴