产品微生物检测方法

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1、产品微生物检测方法B1产品采集与样品处理于同一批号的三个运输包装中至少抽取12个最小销售包装样品，1/4样品用于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时用于复检。抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。在100级净化条件下用无菌方法打开检测的至少3个包装，从每个包装中取样，准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml灭菌生理盐水中，充分混匀，得到生理盐水样液。液体产品用原液直接做样液。如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50ml递增，直到能吸出足够测试用样液。在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度

2、。B2细菌菌落总数与初始污染菌检测方法本方法适用于产品除始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。B2.1操作步骤待上述生理盐水样液自然沉降后取上小清液作菌落计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的营养琼脂培养基15-20ml倒入每个平皿内混合均匀。待琼脂凝固后翻转平皿置35℃±2℃培养46h后，计算平板上的菌落数。B2.2结果报告菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按式（B1）计算结果：X1=A？K＼5……………….B1式中：X1─细菌菌落总数，cfu／g或cfu／ml；A─

3、5块营养营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；K─稀释度。当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。如果样品菌落总数超过本标准的规定，按B2.3进行复检和结果报告。B2.3复检方法将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到本标准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何1次结果平均超过本标准规定，则判定被检样品不合格。B3大肠菌群检测方法B3.1操作步骤取样液5ml接种50mL乳糖胆盐发酵管，置35℃±2℃培养24h，如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。如产酸产气，则划线接种伊红蓝琼脂平板，置35℃±2℃培养18-2

4、4h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。取疑似大肠菌落1-2个革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35℃±2℃培养24h，观察产气情况。B3.2结果报告凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。B4绿脓杆菌检测方法B4.1操作步骤取样液5ml，加入到50mlSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±2℃培养18～24h。如有绿脓杆菌生

5、长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。从培养液的薄菌膜处取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化琼脂平板，置35℃±2℃培养18-24h，观察菌落特征。绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。取可疑菌落涂片作革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。绿脓菌素试验：取2-3个可疑菌落，分别

6、接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃±2℃培养24h，加入氯甲烷3-5ml，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管到移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃±2℃培养24h，培养基小倒管中有气者即为阳性。明胶液化试验：取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃±2℃培养24h，取出放于4-10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。42℃生长试验：挑取可疑培养物，接

7、种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24-48h，有绿脓杆菌生长为阳性。B4.2结果报告被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓杆菌试验均为阳性者，即可报告被检样品检出绿脓杆菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出绿脓杆菌。B5金黄色葡萄球菌检测方法B5.1操作步骤取样液5ml，加入到50mlSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±2℃培养24h。自上述增菌液中取1-2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35℃±2℃培养24-48h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，

8、大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成