2009级生物技术本科发酵工程实验讲义

《2009级生物技术本科发酵工程实验讲义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验报告样式：实验名称：地衣芽孢杆菌生物制剂的发酵专业：年级：姓名：学号：实验组号：组内编号1、实验目的2、实验原理3、实验材料及仪器设备:实验材料名称，仪器名称及主要规格、器皿名称及规格等。4、实验内容：对一些实验，根据要求列出实验步骤5、实验记录：记录实验数据，写明物理量和单位，并注意有效数字保留；6、实验结果：数据处理及结果表示（可用图表等形式）。7、讨论及体会：对实验中获得的新认识、新体会、存在的问题、进一步的想法等进行讨论。发酵工程实验日程表序号实验项目时间实验内容安排1培养基制备与灭菌预计8学时1、固体培养基配制500ml/组，分装2瓶；2、培养皿清洗及包扎15副/组；

2、无菌水100ml/瓶；3、吸管包扎4支/组；4、液体培养基制备：800ml/组，分装16瓶，灭菌0.1MPa,20min.2菌种活化与种子制预计3学时1、菌种的分离纯化:超净工作台消毒（UV照射20min）→75%乙醇擦拭台面；活性菌剂→无菌水溶解(稀释10-2倍)→涡旋震荡5min；倒平板(10副平皿/组)→平板划线分离→30℃倒置培养。2、接种准备工作：超净工作台消毒（UV照射20min）→75%乙醇擦拭台面。1、种子培养接种：平板单一菌落→种子培养基（2环/瓶）→涡旋震荡3-5min；2、摇瓶培养：摇床设置及调节（30℃，200r/m）→摇瓶固定→启动培养。3发酵罐结构、操作

3、规程及分批发酵预计8学时1、发酵培养基配制：18L。2、发酵罐操作培训：发酵罐初始状态检查及调节→清洗（清水冲洗2-3遍）→发酵罐运行启动→发酵罐运行参数设置→空罐灭菌（0.15MPa,20min）→进料→实罐灭菌（0.1MPa维持30min）→冷却→火焰封口接种→发酵参数稳定状态调节与维持。3、发酵取样：取样管灭菌→取样→再灭菌；4、发酵中间过程分析（0hour）：pH测定（pH计or精密试纸）；酸度（中和法）；残糖测定（折光法）；菌体浓度测定（A600光密度法）5、中间取样：每间隔4h,取样管灭菌→取样→再灭菌.共计4-6次；4形态观察、细胞的分离提取预计5学时1、显微观察2、

4、地衣芽孢菌剂灌装及包装3、发酵结束工作：器皿、设备还原，环境清洁-9-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------0概况地衣芽孢杆菌细胞形态为杆状，呈单生排列，其活菌形式进入人或动物肠道后，对葡萄球菌、酵母菌等致病菌有拮抗作用，而对双岐杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌有促进生长作用，可促使机体产生抗菌活性物质，杀灭致病菌。此外，地衣芽孢杆菌通过夺氧生物

5、效应可以使肠道缺氧从而有利于大量厌氧菌生长，是一种重要的微生态调节剂，目前已大规模应用于“整肠生”等药品及其它保健制剂的制造生产。由于地衣芽孢杆菌的代谢过程会受到营养基质、pH、温度、溶解氧等一系列外界条件的影响，因此选择合适的发酵条件对于菌剂的生产是非常必要的。本实验要求同学结合发酵工程基本知识，分离一株地衣芽孢杆菌，并对该进行发酵罐扩增，为该菌剂的液体发酵生产和应用提供的资料。1材料方法1.1材料及设备1.1.1增殖培养基蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L，pH值7.2。1.1.2发酵培养基可溶性淀粉15g/L，酵母膏0.2g/L，蛋白胨5.0g/L，(NH4)

6、2SO42.5g，KH2O42.5g/L,MgSO4·7H2O0.025g/L,CaCO30.05g/L,初始pH为7.2。1.1.3设备可见分光光度计22PC(上海棱光技术有限公司)；振荡培养器(上海博迅实业有限公司)；超净工作台(苏晋集团安康公司)。机械搅拌通气式发酵罐（上海国强生物工程公司）。1.2操作方法1.2.1培养基配制（1）计算　按固体培养基和液体培养基的配方，计算500mL固体培养基和800mL液体培养基各物质的用量。（2）称药品　用砝码天平准确称量各物质。（3）溶解　将培养基的组分放加在500mL烧杯的水中，玻璃棒搅拌溶解。（固体培养基琼脂在室温下不能溶解，需加热

7、煮化）。（4）分装　液体培养基每组按50L培养基/250mL三角瓶规格分装16瓶；固体培养基分装250mL培养基/250mL三角瓶。-9-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------（5）包扎三角瓶口塞上瓶塞后用牛皮纸和线绳包扎，以防灭菌时