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时间:2018-09-17
《2009级生物技术本科发酵工程实验讲义》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、实验报告样式:实验名称:地衣芽孢杆菌生物制剂的发酵专业:年级:姓名:学号:实验组号:组内编号1、实验目的2、实验原理3、实验材料及仪器设备:实验材料名称,仪器名称及主要规格、器皿名称及规格等。4、实验内容:对一些实验,根据要求列出实验步骤5、实验记录:记录实验数据,写明物理量和单位,并注意有效数字保留;6、实验结果:数据处理及结果表示(可用图表等形式)。7、讨论及体会:对实验中获得的新认识、新体会、存在的问题、进一步的想法等进行讨论。发酵工程实验日程表序号实验项目时间实验内容安排1培养基制备与灭菌预计8学时1、固体培养基配制500ml/组,分装2瓶;2、培养皿清洗及包扎15副/组;
2、无菌水100ml/瓶;3、吸管包扎4支/组;4、液体培养基制备:800ml/组,分装16瓶,灭菌0.1MPa,20min.2菌种活化与种子制预计3学时1、菌种的分离纯化:超净工作台消毒(UV照射20min)→75%乙醇擦拭台面;活性菌剂→无菌水溶解(稀释10-2倍)→涡旋震荡5min;倒平板(10副平皿/组)→平板划线分离→30℃倒置培养。2、接种准备工作:超净工作台消毒(UV照射20min)→75%乙醇擦拭台面。1、种子培养接种:平板单一菌落→种子培养基(2环/瓶)→涡旋震荡3-5min;2、摇瓶培养:摇床设置及调节(30℃,200r/m)→摇瓶固定→启动培养。3发酵罐结构、操作
3、规程及分批发酵预计8学时1、发酵培养基配制:18L。2、发酵罐操作培训:发酵罐初始状态检查及调节→清洗(清水冲洗2-3遍)→发酵罐运行启动→发酵罐运行参数设置→空罐灭菌(0.15MPa,20min)→进料→实罐灭菌(0.1MPa维持30min)→冷却→火焰封口接种→发酵参数稳定状态调节与维持。3、发酵取样:取样管灭菌→取样→再灭菌;4、发酵中间过程分析(0hour):pH测定(pH计or精密试纸);酸度(中和法);残糖测定(折光法);菌体浓度测定(A600光密度法)5、中间取样:每间隔4h,取样管灭菌→取样→再灭菌.共计4-6次;4形态观察、细胞的分离提取预计5学时1、显微观察2、
4、地衣芽孢菌剂灌装及包装3、发酵结束工作:器皿、设备还原,环境清洁-9-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------0概况地衣芽孢杆菌细胞形态为杆状,呈单生排列,其活菌形式进入人或动物肠道后,对葡萄球菌、酵母菌等致病菌有拮抗作用,而对双岐杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌有促进生长作用,可促使机体产生抗菌活性物质,杀灭致病菌。此外,地衣芽孢杆菌通过夺氧生物
5、效应可以使肠道缺氧从而有利于大量厌氧菌生长,是一种重要的微生态调节剂,目前已大规模应用于“整肠生”等药品及其它保健制剂的制造生产。由于地衣芽孢杆菌的代谢过程会受到营养基质、pH、温度、溶解氧等一系列外界条件的影响,因此选择合适的发酵条件对于菌剂的生产是非常必要的。本实验要求同学结合发酵工程基本知识,分离一株地衣芽孢杆菌,并对该进行发酵罐扩增,为该菌剂的液体发酵生产和应用提供的资料。1材料方法1.1材料及设备1.1.1增殖培养基蛋白胨10g/L,牛肉膏3g/L,NaCl5g/L,pH值7.2。1.1.2发酵培养基可溶性淀粉15g/L,酵母膏0.2g/L,蛋白胨5.0g/L,(NH4)
6、2SO42.5g,KH2O42.5g/L,MgSO4·7H2O0.025g/L,CaCO30.05g/L,初始pH为7.2。1.1.3设备可见分光光度计22PC(上海棱光技术有限公司);振荡培养器(上海博迅实业有限公司);超净工作台(苏晋集团安康公司)。机械搅拌通气式发酵罐(上海国强生物工程公司)。1.2操作方法1.2.1培养基配制(1)计算 按固体培养基和液体培养基的配方,计算500mL固体培养基和800mL液体培养基各物质的用量。(2)称药品 用砝码天平准确称量各物质。(3)溶解 将培养基的组分放加在500mL烧杯的水中,玻璃棒搅拌溶解。(固体培养基琼脂在室温下不能溶解,需加热
7、煮化)。(4)分装 液体培养基每组按50L培养基/250mL三角瓶规格分装16瓶;固体培养基分装250mL培养基/250mL三角瓶。-9-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------(5)包扎三角瓶口塞上瓶塞后用牛皮纸和线绳包扎,以防灭菌时
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