人参土传真菌病害的生物防治

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1、黑龙江大学硕士学位论文人参土传真菌病害的生物防治姓名：姜竹申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：李晶20100430中文摘要利用枯草芽孢杆菌防治人参土传病害是一种高效、安全的植保新途径，本研究筛选到两株对人参立枯丝核菌(RhizoctoniasolanO、尖镰孢菌(Fusariumoxysporum)等多种病原菌有较强的抑菌效果并且抑菌谱较广的生防菌株。对其形态学、生理生化和分子生物学鉴定的基础上，对两菌株的发酵培养基、最佳发酵条件、20L罐发酵、抗菌粗提物进行了研究。人参病原菌的分离与鉴定。从人参染病的根部、茎

2、部、叶部组织中分离纯化两株病原菌。经初步鉴定爬l菌株为立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)和c16菌株为尖镰孢菌(Fusariumoxysporum)。拮抗菌的分离、纯化与鉴定。从人参根际土壤、未栽新土和人参组织中分离纯化出32株对人参立枯丝核菌(尼solanO、人参尖镰孢菌僻oxysporum)和人参腐皮镰孢菌饵solanO具有拮抗作用的细菌菌株。通过复筛，拮抗细菌B59和X1菌株对起1、e16等真菌抑菌率的平均值达到90％以上，表明细菌B59和X1不仅抑菌谱广，而且抑茵作用明显，是两株具有高效抑菌活性的菌株，因此

3、对细菌B59和X1进行菌株鉴定、发酵研究和抗菌物质分析。对B59菌株、X1菌株的形态特征、培养性状、生理生化特征和16SrDNA分子生物学鉴定，结果显示为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。通过正交试验对B59菌株和X1菌株的培养基成分进行优化，并通过单因素试验对两菌株的最适培养条件进行了研究。B59菌株培养基成分和最适培养条件为：葡萄糖15g／L，牛肉膏5．0g／L，NaH2P04+Na2HP045g／L，pH8，250mL三角瓶中装入25mL培养基，接种量为1．5％，30℃，160r／min培养。X1菌株的最佳

4、培养基成分和培养条件为：葡萄糖15g／L，牛肉膏+酵母膏(1：1)5．0g／L，NaH2P04+Na2HP045．0g／L，pH8，250mL三角瓶中装入25mL培养基，接种量为l％，25℃，160r／rain培养。优化后培养的枯草芽孢杆菌XI和B59菌株对人参腐皮镰刀菌(FusariumsolanO抑菌能力显著提高。利用优化后的培养基和培养条件对B59和Xl菌株进行了20L罐发酵，培养黑龙江大学硕士论文24h后，枯草芽孢杆菌B59菌剂的活芽孢数为2．6×109cfu／mL：枯草芽孢杆菌X1菌剂的活芽孢数为2．3x109cfu／

5、mL。B59和X1的发酵液和抗菌粗提物对供试病原菌均有较强的抑制作用，说明B59和X1菌株在代谢过程中分泌了具有拮抗作用的蛋白或多肽类物质。关键词：人参：土传真菌；枯草芽孢杆菌；发酵条件n英文摘要AbstractItisaneffectiveandsafemeaswetocontrolginsengsoil—bornfungidiseasesbyusingantagonisticbacteriaofBacillussubtilis．TwostrainsofBacillussubtilisB59andX1wereisolatedf

6、romsoilsamplesofginsengplantrhizosphere，whichshowedstronginhibitiononginsengRhizocWnmsolani，Fusariumoxysporumandotherpathogenicfungiandhadawidespectrumofantimierobialactivity．Inordertodevelopandutilizethestrainsbetter,thispapercarriedoutadetailedmsearchontheidentific

7、ationofthestrains，optimizationoftheliquidculturemediumcomponentsandconditions，fermentationpilottest,andcrudeextractionofantimicrobialsubstances．Theresultsalereportedasfollows：Isolationofginsengpathogen．TwopathogensofDglandC16wereisolatedfromtheinfectedginsengroot，ste

8、mandleaf,andwereidentified鹪RhizoctoniasolaniandFusariumoxysporumonthebasisoftheirmorphologicalcharacteristicsandpropertiesaccording