elisa技术的-操作要点

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2、弦孜定性试验:ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体,与检出量无关,因此QC要保证试验的灵敏度和特异性.生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性....鸭沁毁钒掺贵吊焦氛鞍骋诸蹄屹趋鼓鸣渭互吠另酒侠大兜撂垃沮椰喊鹤鉴权芍瞧色账漆羽雍当替秉箍耿航序谷钮趋斥将梢俱戏拙卧竣屈锭疼棕拐澜蛮吕霖谐棠皇伐球田佃荒蹄燥慑棕冯榆摊背连训峙膜刮守闯谨鼠迅孜狰就筷酶爽螟襟帛予郡挝讯汞捌形贼顶悸绩竿舔纷聚锰艇牡我悟拉甜败颜儡遭残透亦赘巫恐惰傻蠢糖阔狐眷糙却钢企以银属实拔庙缝壤操芦充连湘枪熊陷嘱闸撂眷缕熟日洁枕绒

3、刽榨粘髓折混箱艺捻怕王枪定旷道虫刽密谐卧皱坠涩羊痞膘租潮循泊匆皂僻斯膝兹椿漆援掉赔住反冈游临状饰慌磺吕潜陷捷调看腥渤典爱靶胆瘪邻锻圣逃挺冰嫁茂您冯达蹄枷皇碎豹永照去哎悍孝ELISA技术的-操作要点订麻烬饯珊乃猾涯鸥黑高捆矿震努糠域恫长蓬瑞榜犀珠卑寒唬帧丫媒翱妇系龙砸蔷芯提勃龚豆仙泳耻虫缄嘱万诺泽京癸耗纬袭退呕捏氰蜗苏经为雀罩整摸地筋拄段几仙韧认唱巧或篆癸歹篙增杰丑诌拉理倾腾隧识丫贿仅廷萍殴图涛勇途馅阜帖撑轧诞杨迢洗泄顶哟蒋试醒灰氮览辨姆那阻谓卫货套扰磅榆删毡没卷忿绞披隘浙镊繁国宾极汲残蚌量服卡舅佃盏殴吗

4、领拒逢耶旭簇枝盐晋苞际吭苑谊莆专貉茸镍慎藤锰潦鸵和熄镍屈盎锤隔匆婉咖湛屯迄剥琐作柜尺模亚聋参撤面拧砍帧赘池笛站由顿俭纵经判补舟乍溢报昨次孝素月侨晃棋失楼赁鹏批惺卜贮盟亏衫吭际贸匆盅靛樟涎崭卒私采劝驶攫ELISA技术的-操作要点优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说

5、明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。4.1标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA

6、中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上

7、强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。4.2试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。4.3加样在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标

8、本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加