高中生物 专题5 第18课时血红蛋白的提取和分离同步课时作业 新人教版选修1

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1、第18课时　血红蛋白的提取和分离目标导航　1.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。2.理解缓冲液的组成和作用机理。3.体验提取生物大分子的基本过程和方法。一、分离蛋白质的基本方法原理1．蛋白质的分离方法——凝胶色谱法凝胶色谱法也称做________________，是根据________________的大小分离________的有效方法。相对分子质量直径大小运动方式运动速度运动路程洗脱次序大____凝胶颗粒空隙直径，被排阻在____垂直向下移动____较短先从凝胶柱洗脱出来小____凝胶颗粒空隙直径，可以进入颗粒内部垂直向下移动，无规则扩散进入凝胶颗粒__

2、__较长后从凝胶柱洗脱出来2.缓冲液的作用和组成(1)作用在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界________和________对溶液________的影响，维持pH基本不变。纯水的pH因加入少量的强酸或强碱而发生很大变化。然而，1滴浓盐酸加入到1LCH3COOH—CH3COONa混合溶液或NaH2PO4—Na2HPO4混合溶液中，[H＋]的增加不到百分之一(从1.00×10－7mol/L增到1.01×10－7mol/L)，pH没有明显变化。(2)组成缓冲溶液通常由________种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的____________就可以制得________

3、________________的缓冲液，其类型主要有3种：①弱酸及其对应盐，如CH3COOH—CH3COONa，H2CO3—NaHCO3。②多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐，如NaHCO3—Na2CO3，NaH2PO4—Na2HPO4。③弱碱及其对应盐，如NH3·H2O—NH4Cl。3．电泳(1)概念电泳是指____________在________的作用下发生________的过程。许多重要的生物大分子，如________、________等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上________或________。在电场的作用下，这些带电分子会向着__

4、______________的电极移动。(2)原理在同一电场下，由于各种分子________性质的差异及分子本身________、________的不同，使带电分子产生________________，从而实现样品中各种分子的分离。(3)常用方法①____________电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大小和形状不同而不同，从而得以分离。②________________电泳加入SDS作用：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链；与各种蛋白质结合形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质原有

5、的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。二、粗提取血红蛋白1．红细胞的洗涤(1)目的：____________，以利于后续步骤的分离纯化。(2)过程：为防止血液凝固，需在采血器中加入抗凝血剂柠檬酸钠：500r/min，离心2min，这样做的目的是防止红细胞与白细胞一同沉淀，达不到分离效果：用胶头吸管吸去上层黄色血浆：向盛有暗红色红细胞液体的烧杯中加入五倍体积的生理盐水，缓缓搅拌10min：直至上清液中没有黄色，表明红细胞已经洗涤干净，否则需重复洗涤(3)操作提示：洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要，洗涤次数少，无法除去血浆蛋白，

6、离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离效果。2．血红蛋白的____(1)方法：将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加______到原血液的体积，再加40%体积的______，置于磁力搅拌器上充分搅拌10min。(2)目的：使红细胞吸水____，血红蛋白释放出来。(3)原理：渗透作用。3．分离血红蛋白溶液(1)方法①将搅拌好的混合液转移到__________中，以2000r/min的速度____10min。②将离心管中的液体部分用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层。③将滤液置于分液漏斗中，静止片刻后，分出下层的红色透明液体，即为血红蛋白溶液。(2)目的：使_______

7、_与大部分杂质分离开，便于后续纯化。(3)离心后试管中的溶液分为4层，最上面的一层是甲苯层，第二层是脂溶性物质沉淀层，第三层是血红蛋白水溶液层，最下层是杂质沉淀层。4．粗分离——透析(1)原理：______能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。(2)过程：取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12h。(3)目的①除去样品中相对分子质量较小的杂质。②用于更换样品的缓冲液。三、纯化蛋白质1．凝胶色谱柱的制作(1)取长40cm，内径为1.6cm的________