facscalibur操作手册

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1、FACSCalibur操作手册一、构造1.电源：在仪器的左侧下方2.仪器的面板：在仪器前方面板的右下方有3个流速控制键（LO/MED/HI）及3个功能控制键（RUN/STANDBY/PRIME）（下图4.1）。a:流速控制：LO:样品流速12ul/minMED:样品流速35ul/minHI:样品流速60ul/minb:功能控制：RUN：绿色时表示样品开始输入，黄色表示仪器不正常。STANDBY：无样品或者预热时的位置，此时激光管的功率会下降，可延长其寿命。PRIME：自动冲洗进样针，一个反冲的过程，通常在进样针有堵

2、塞现象的时候启用。c:鞘液桶与废液桶：位于仪器正面下方的储液箱内。3.样品的输入区在仪器的中部:上样针、样品支架（下图4.3）。4.数据处理系统：苹果机CELLQUEST软件。二、模板的建立：若在桌面MODLE中没有你所需要的模板，则重新建立一个，具体的步骤入下：1.双击打开CELLQUEST软件，2.点击Acquire>>AcquireDescripton,打开AcquireDescripton对话框，点击chang按钮建立数据存放的路径，以及文件的名称。根据样品所标记的荧光染料选择合适的接收通道，FACSCal

3、ibur有3个接收通道。2008年6月升级为4通道，增加633nm的激光器，可检测APC、CY5等荧光素。3.然后在对话框的右侧对应的通道位置写上荧光素的名称。4.在工具栏中选择散点图工具，其横坐标FSC-H，纵坐标为SSC-H。5.在工具栏中点击所选的图形类型，拉动鼠标成图，然后点击X或者Y轴的名称，更改坐标轴的名称。6.根据你的实验对照样品设定gate，在工具栏中选择gate的不同形状，将在图形中集中得成团细胞选中。同时设定Marker线，点击工具栏中的横线或者正方形椭圆等，在直方图中我们使用横线作标记，散点图

4、中选择十字或者其他正方形椭圆以及不规则图形作为标记。7.测定实验样品。三、双色检测步骤：以FITC、PE为例。1.打开桌面MODEL文件夹，双击选择当日所需模版FITCPE。2.工作栏Acquire>>Acquisition&Storage>>设定好收集记录的细胞区域及细胞数10000或20000后点击OK。3.设置存储文件的路径：工作栏Acquire>>ParameterDescription>>Driectory：Change>>Data>>XX老板>>XX使用人>>建立新日期文件，话框左下角点击NewFold

5、er，输入如070101>>Create。4.设置存储文件名字：工作栏Acquire>>ParameterDescription>>File：Change设置存储文件名字>>在CustomPrefix栏改名>>OK。5.如果用以前的相对应实验的实验条件：工作栏Cytometer>>InstrumentSettings>>Open>>Data>>寻找相应的实验文件>>Open>>回到先前InstrumentSettings的对话框>>Done>>OK6.AcquistionControl对话框setup打勾>>在上样

6、处更换对照样品管（BLANK空白细胞）>>点击Acquire>>根据样品情况调整Detectors/Amps，调整FSC，SSC的Voltage大小，把细胞调整到适当的位置>>调整FL1-H，FL2-H的Voltage大小，调整阴性细胞群主要集中于左下角>>点击Pause>>setup去掉勾>>点击Acquire正式收集细胞。7.前一个样品采集完后，setup打勾>>在上样处更换单染FITC的对照样品管>>如果发现FITC荧光串色到PE通道，调整Compensation对话框中FL2-0.0%FL1，扣除串色。>>

7、点击Pause>>setup去掉勾>>点击Acquire正式收集细胞。8.前一个样品采集完后，setup打勾>>在上样处更换单染PE的对照样品管>>如果发现PE荧光串色到FITC通道，调整Compensation对话框中FL1-0.0%FL2，扣除串色。>>点击Pause>>setup去掉勾>>点击Acquire正式收集细胞。9.后面的样品按照现对照样品仪器条件采集，更换样品，更改样品名字，直接点击Aquire开始记录数据。10.待收集到相应的细胞数，仪器会自动停止记录。如果细胞数不够预设的量，或是需要中途停止收集

8、，点击Pause>>点击Save直接记录数据。四、单色检测的基本操作步骤：1.在桌面上双击MODEL文件夹，选择自己需要的实验模板2.菜单栏Acquire>>Acquisition&Storage设定收集的数目3.菜单栏Acquire>>ParameterDescription设置存储文件的路径.设置存储文件名字4.调用以前的实验模板5.或者根据对照样品情况