SNT1164.1-2011牛传染性鼻气管炎检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１１６４．１—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１１６４．１—２００２，ＳＮ／Ｔ１１６４．２—２００３牛传染性鼻气管炎检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犻狀犳犲犮狋犻狅狌狊犫狅狏犻狀犲狉犺犻狀狅狋狉犪犮犺犲犻狋犻狊２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛传染性鼻气管炎检疫技术规范ＳＮ／Ｔ１１６４．１—２０１１中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮

2、政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张１．２５字数３３千字２０１１年１１月第一版２０１１年１１月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２２５８７定价２１．００元版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１１６４．１—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１１６４．１—２００２《牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程》和ＳＮ／Ｔ１１６４．２—２００３《牛传染性鼻气管炎微量血清中和试验操作规程》

3、。本标准与ＳＮ／Ｔ１１６４．１—２００２和ＳＮ／Ｔ１１６４．２—２００３相比，主要的技术性变化如下：———增加了从精液样品中分离病毒的方法；———删除了ＳＮ／Ｔ１１６４．１—２００２中７．２．４；———修改了病毒毒价测定方法；———增加了实时荧光ＰＣＲ方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人：罗琼、田纯见、苏卫、陈茹、林志雄、鱼海琼、董志珍、霍蕾、唐泰山、张常印。

4、本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１１６４．１—２００２；———ＳＮ／Ｔ１１６４．２—２００３。Ⅰ版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１１６４．１—２０１１牛传染性鼻气管炎检疫技术规范１范围本标准规定了牛传染性鼻气管炎的病毒分离鉴定、微量血清中和试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应和实时荧光ＰＣＲ检测技术规范。本标准适用于进出境牛的牛传染性鼻气管炎检疫和诊断。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。Ｇ

5、Ｂ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ１９４８９—２００８实验室生物安全通用要求ＳＮ／Ｔ１１６４．３牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程ＳＮ／Ｔ１１９３基因检验实验室技术要求ＳＮ／Ｔ１９１８牛传染性鼻气管炎聚合酶链反应操作规程ＯＩＥ《ＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＴｅｓｔａｎｄＶａｃｃｉｎｅｓｆｏｒＴｅｒｒｅｓｔｒｉａｌＡｎｉｍａｌｓ》（２００８年）第二部分关于牛传染性鼻气管炎的诊断技术规定。３缩略语ＩＢＲ（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｏｖｉｎｅＲｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）：牛传染性鼻气管炎ＴＣＩＤ５０：半数组织细胞感染量ＢＫ：

6、原代胎牛肾细胞ＭＤＢＫ：牛肾传代细胞系ＢＴ：原代胎牛睾丸细胞ＣＰＥ：致细胞病变作用ＥＬＩＳＡ：酶联免疫吸附试验ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）：聚合酶链反应ｂｐ（ｂａｓｅｐａｉｒ）：碱基对ＥＤＴＡ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）：乙二胺四乙酸钠犜犪狇（犜犪狇ＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）：犜犪狇ＤＮＡ聚合酶ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ：实时荧光ＰＣＲＣｔ值：荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数ＵＤＧ（ｒａｃｉｌＤＮＡｇｌｙｃｏｓｙｌａｓｅ）：尿嘧啶ＤＮＡ糖基化酶１版权所有·禁止翻制、电子发售

7、犛犖／犜１１６４．１—２０１１４检疫方法４．１病毒分离和鉴定４．１．１材料准备４．１．１．１器材４．１．１．１．１无菌６孔、２４孔、９６孔平底组织培养板。４．１．１．１．２无菌棉拭子。４．１．１．１．３１０ｍＬ无菌试管和１．５ｍＬ无菌离心管。４．１．１．１．４细胞培养瓶。４．１．１．１．５单道、８道微量可调移液器（２０μＬ～２００μＬ、１００μＬ～１０００μＬ）。４．１．１．１．６灭菌常规玻璃器材。４．１．１．１．７二氧化碳培养箱。４．１．１．１．８电热恒温水浴箱。４．１．１．１．９生物安全柜。４．１．１．１．１０倒置显微镜。４．１．１．１．１１２

8、００μＬ、１０００μＬ灭菌吸嘴。４．１．１．１．１２冰箱（－２０℃保存血清，－７０℃保存种毒）。４．１．１．２试剂４．１．