SNT1161-2002衣原体感染检测方法补体结合试验.pdf

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1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1161-2002衣原体感染检测方法补体结合试验Protocolofcomplementfixation-Testforchlamydiainfection2002一11一25发布2003一05一01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T1161-2002前言本标准的附录A、附录B,附录C、附录D,附录E均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位;中华人民共和国湖北出人境检验检疫局、湖北省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人:徐涤平、黄晨、刘泽文、陈平、段正赢、颜

2、小平、陈建军、杨宜生，sx/T1161-2002衣原体感染检测方法补体结合试验范围本标准规定的补体结合试验(CF)包括直接补体结合试验(DirectComplementFixationTest,DCF)和间接补体结合试验(IndirectComplementFixationTest,ICF),DCF适用于猪以外的哺乳动物和鹦鹉、鸽(三年龄以上老鸽除外)、火鸡衣原体病的检疫和诊断。ICF适用于其他禽鸟和猪衣原体病的检疫和诊断。2材料准备2.1器材:12tornX37mm.试管、试管架、水浴箱、U型微量反应板(8X12孔)。2.2补体:由官方认可单位供应，按说明书使用和

3、保存。试验前须对补体进行效价滴定。滴定方法见附录A,2.3溶血素:由官方认可单位供应。试验前须对溶血素进行效价滴定，以后每隔2个一3个月测定效价一次。滴定方法见附录Be2.4100绵羊红细胞悬液:制备方法见附录C,2.5敏化红细胞:制备及使用方法见附录A,被检血清:按常规方法采血，分离血清，要求不溶血、无腐败，在血清中加人。01%硫柳汞或。.I%2.6叠氮钠防腐，试验前需灭能。不同动物血清灭能的温度和时间见附录D.了抗原和标准阳性血清、指示血清、阴性血清:由官方认可单位供应，按说明书使用。抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录E,3操作方法3.1直接补体结合试验3.1.

4、1试管法按表I的程序操作。试验要同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。表飞直接补体结合试验〔试管法)单位为毫升sN/T1161-2002表1(续)单位为毫升被检血清各项对照抗补体阳性阴性抗原生理成分试验管溶效价对照血清血清对照血索盐水I:41:81+161:321:641:128l:42工作量1-42工作量混匀，4`C16h-18h感作，取出后37C水浴30min敏化0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.2红细胞混匀，37C水浴30min##十+++++##结果50%1‘32到足全全2575

5、%全溶全溶全全溶全溶全溶全不落不落落落溶不If不洛3.1.2微量法:用U型8x12孔微量反应板。按表2的程序操作。试验同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。表2直接补体结合试验(微最法)单位为微升被检血清各项对照抗补体阳性阴性抗原生理成分试验孔溶效价对照血清血清对照血索盐水1:41+81:161:3211641+1281:42上作量1:42工作量血清25252525一}25252525252工作量252525252525252525抗原2*u.5050505050505050505050补体生理252550100盐水拿昆匀

6、，4C16h--18h感J作，取出{后37℃水洲fi30min敏化505050505050SO50红细胞50{50{馄匀，37C水浴30min##++十十+十洋#结果50%I，32判定全全25%75全溶全溶全全溶全溶全溶全不洛不榕洛落溶不洛不落3.2间接补体结合试验3.2.1试管法:按表3的程序操作。表3间接补体结合试验(试管法)单位为毫升直接补被检血清间接补反对照抗补体反对照抗原对照阳性阴性对照效价成分试验管指示血清血清血清1;41:81:161:321:64I:128I:41工作量1:41工作量血清0.飞0.10.10.10.1010.10.I0.11工作量0.

7、10.10.1o.1o.10.10-1o.Io.1o.1抗原SNIT1161-2002表3(续)单位为毫升被检血清间接补反对照直接丝抗补体反对照抗原对照阳性阴性对照效价成分试验管指示血清血清血清1:41:81:161:321:641:1281:41工作量1:41工作量混匀，4'C‘h-Sh感作1工作量0.10.10.10.10.10.10.10.10.1指示血清2单位0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.2补体生理盐水0.20.10.2混匀，4'C过夜或8h^10h，取出后37C水浴30min敏化0.20.20.20.20.20.20.