SNT1141-2002鳞球茎茎线虫检疫鉴定方法.pdf

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1、鳞球茎茎线虫检疫鉴定方法MethodsforquarantineandidentificationofDitylenchusdipsaci(Kühn)FilipjevSN／T1141—2002前言本标准的附录B和附录C为规范性附录，附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、南京农业大学。本标准主要起草人：宋绍祚、戚龙君、林茂松。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。1范围本标准规定了对鳞球茎茎线虫检疫和鉴定方法。本标准适用于花卉和蔬菜的块茎、鳞茎、球茎等根茎部分和其他寄主植物种子、花、茎、叶及残体中鳞球茎茎线虫

2、的检疫和鉴定。2原理鳞球茎茎线虫Stemandbulbnematode，学名：Ditylenchusdipsaci(Kühn，1857)FiIipjeV，属于线虫门(Nemata)、侧尾腺纲(Secernentea)、垫刃目(Tylenchida)、粒线虫科(Anguinldae)、茎线虫属(Dityenchus)。是一种迁移性内寄生线虫，被侵染的球茎发生腐烂，切成片时有褐色环纹。受侵染的植株常矮化、肿胀、畸形，甚至最终死亡。在植物的种子、花、花序、芽、茎、匍匐茎、根状茎及土内可发现此虫。该线虫是一种危害450多种植物(参见附录A)的寄生性线虫，又称作起绒草茎线虫，它的地理分布、寄主

3、范围、传播途径、生物学和形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。3仪器、用具3.1生物显微镜(100倍一1000倍，具有目镜测微尺或者绘图仪、监视器等)。3.2体视显徽镜(10倍～90倍，具透射光源)。3.3冰箱。3.4加热板(80℃以下)。3.5打孔器。3.6载玻片。3.7盖玻片。3.8分样筛(100目、500目)。3.9烧杯(500mL、1000mL)。3.10漏斗。3.11漏斗架。3.12乳胶管。3.13止水夹。3.14凹玻片。3.15指形管。3.16剪刀。3.17挑针。3.18浅盘(上盘、下盘)。3.19线虫滤纸。3.20酒精灯。3.21培养皿。3.22试管。3.23纱布。3.24

4、干燥器。3.25记号笔。3.26玻璃纤维丝(3mm～5mm)。4药品4.1指甲油。4.2TAF固定液(40％甲醛7mL、三乙醇胺2mL和蒸馏水91mL混合而成)。4.3乳酚油(苯酚20mL、乳酸20mL、甘油40mL和蒸馏水20mL混合而成)。4.4石蜡。5现场检疫5.1抽样5.1.1抽样方法棋盘式、五点式或随机抽样。5.1.2抽样数量5.1.2.1块茎、鳞茎、球茎按总件数的5％～20％抽样，最低抽检10件且不少于l000粒，取样的数量为：500粒以下取一份；501粒～2000粒取二份；2001粒～5000粒取三份；5001粒～10000粒取四份；10001粒以上每增加10000粒增

5、取一份样品，不足10000粒的余量计取一份样品。每份样品为20粒。5.1.2.2整株植物或者插枝按总件数的5％～20％抽样，最低抽检10件且不少于500株。取样的数量为：50株以下抽取五株；51株～200株抽取10株；201株～1000株抽取15株；1001株～5000株抽取20株；5001株以上每增加5000株增取五株，不足5000株的余量计取五株样品。5.1.2.3种子按总件数的5％～20％抽样，最低抽检10件，小包装(指最小单位包装不大于0.5kg的)，只扦取室内检验样品。取样数量为：10kg以下取一份；11kg～100kg取二份；101kg～500kg取三份；501kg～10

6、00kg取四份；1001kg～2000kg取五份；2001kg～5000kg取六份；5001kg～10000kg取七份；lO001kg～100000kg，每增加5000kg增取一份样品，不足5000kg的余量，计取一份样品；100001kg以上每增加50000kg增取一份样品，不足50000kg的余量，计取一份样品。每份样品的重量为1kg～2kg。5.2外观症状的检查对花卉和蔬菜的块茎、鳞茎、球茎等根茎部分和其他寄主植物种子及花、茎、叶进行检查，注意检查有无矮化、肿胀、畸形和腐烂等症状，收集上述可疑植物材料及所夹带的土壤等，一并带回实验室检验。6实验室检验对于抽取的样品，可用浅盘分离

7、法或漏斗法分离线虫(见附录B)。分离获得的水样在体视显微镜下检查，然后挑取线虫若干条制成临时玻片(制作方法见附录C)在显微镜下镜检，观察线虫的形态结构。7形态鉴定特征7.1茎线虫属形态鉴定特征雌虫一般不肥大，不弯成螺旋形，长0.6mm～1.5mm，有的可达2mm；表皮有很细的环纹，侧区有四条至六条刻线；口针细小，多数长度为7μm～11μm；中食道球有或无瓣，偶尔无明显的中食道球，峡部与后食道腺之间无缢缩，后食道腺短或长，不覆盖、短覆盖或长覆盖肠；雌虫单生殖