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1、d植物内生菌分离处理方法文献材料前处理第一次消毒第二次消毒（含三消）处理对照培养基刘明志，2011南方红豆杉的老树皮、幼茎、叶截成2～3cm长的小段，去除树皮层75%酒精中浸泡30s0．1%升汞溶液浸泡8min，无菌水冲洗3～5次研磨成匀浆液，倾倒于PDA上切成0．5cm左右的块，接种于有100mgL－1青霉素和链霉素的PDA固体培养基表面。每皿10块刘金花2011黄花蒿的根，茎，叶叶切成1cm2,茎和叶切成1cm左右小段（两端皆有切口）将根，茎，叶一次用75%酒精浸1min1%的次氯酸钙溶液浸泡1min,用无菌水冲洗5
2、次置于含双抗的VA培养基平板培养待切口处长出菌落后转至PDA培养基进行内生真菌的分离宋培勇2011珙桐茎、叶和叶柄将采集的新鲜珙桐的茎、叶和叶柄分别用流水冲洗,风干表面水分,剪成小块或小段,无菌水漂洗2次75%酒精浸泡1min再用2%NaClO溶液中浸泡3min,转入75%酒精中浸泡30s,接着用无菌水漂洗3次,取最后一次漂洗液涂布NA平板作为对照平放于NA平板上,28°C培养2−3d孙传伯2011台湾7303毛豆全株采回的样本用自来水洗净,并用无菌纸吸干水分,并用无菌纸吸干水分,切取支根110cm长的小段,须根切成11
3、5cm的小块用75%酒精浸泡5min、7min、10min分别用0.1%升汞溶液处理4min、6min、8min进行表面灭菌,此试验分别重复3次。最后用无菌水冲洗4次,。最后用无菌水冲洗4次将组织块在研钵中充分研磨成匀浆最后一次冲洗液涂3种不同培养基平板,26~28e下培养2~3d,筛选出最佳消毒时间和培养基,将表面消毒彻底棉花根部切块放入灭菌研钵中用无菌水冲洗4次,取上清液涂抹于培养基上。以无菌水冲洗为对照试验。取上清匀浆涂抹于3种不同培养基上,取匀浆涂布于不同培养基平板,每浓度重复3次,然后将培养皿置于26~28e恒
4、温箱中培养2~3d,观察培养出的菌落形态张鑫2011植物圣罗勒的健康叶子将叶子用流水冲洗10min1%的次氯酸钠中浸泡10min0．02mol/L、pH7．0的无菌磷酸钾缓冲液(PB)漂洗4次加无菌水将材料研磨涂布培养李铭,2011石耳目地衣为了诱导产孢，黑化菌株在光照/黑暗(12h∶12h)条件下，于2%的PDA培养基上，18℃下培养3个月刘杰凤2011健康的小白菜，染病的小白菜根，茎，叶流水冲洗干净，剪成小段75％酒精中浸泡3min10％次氯酸钠浸泡茎为8min，根和叶由于气孔较茎大，浸泡5min即可，然后用无菌水浸
5、泡多次，每次3min无菌条件下用适量的PBS缓冲液捣碎以最后一次的漂洗液作对照，30℃下培养一个星期搅拌后静置3min，取上清液0．5mL分别涂布于分离培养基平板上，每种材料做3次平行朱士茂2011新采集的银杏枝条，叶子和根在自来水中冲洗干净，然后将枝条和根截成3－4cm长，将叶子和叶柄分开，分别将根，枝，叶放在不同的灭菌后的广口瓶中（一），根的表面灭菌:0.1%的土温20消毒1min，无菌蒸馏水冲洗2次。（二）枝，叶和叶柄：75%的乙醇消毒30s，无菌蒸馏冲洗3次(一）,根：75%的乙醇消毒30s，无菌蒸馏水冲洗2次，
6、0.1%升汞消毒5min，无菌蒸馏水冲洗5次。(二）枝，叶和叶柄：0.1%升汞消毒7min，无菌蒸馏水冲洗5次茎，将其表皮剥离，用无菌小刀纵切表皮取其中间的部分，然后将其切成0.5cm×0.5cm大小叶和叶柄，用研钵将叶磨碎(内放石英砂和生理盐水)然后用无菌移液管吸取0.2ml放入培养皿中①将以上接入的每种平皿按相同的方法接入5min后用无菌镊子取出;②用无菌蒸馏水冲洗已表面灭菌后的材料，然后将此液体移入培养基中，培养观察。KB培养基:PL培养基:PDA培养基:肖淑贤2011.长势好、无病害的植株在自来水中冲洗干净采用升
7、汞、乙醇、H2O2、次氯酸钠等表面消毒剂进行消毒，无菌水冲洗直接切取植物组织或榨取植物组织汁液稀释王剑峰2011取生长15天马铃薯无表面灭菌方法马铃薯内生菌单菌落的分离取生长15天马铃薯LK99组培苗,剪成长度约1.0cm的带腋芽茎段接种于PSA培养基上,分别于光下(28℃、2200Lx、16hr光/8hr黑暗)或28℃暗培养,3天后光下和黑暗条件下组培苗周围的培养基上出现黄色菌块,挑取黄色菌块,用稀释涂布法[66]分离单菌落。李晓红不同表面消毒方法对核桃叶内生菌分离效果的比较内容残缺）熊亚南2011刺五加植株流水冲洗去
8、土，根，茎，根茎等部流水冲洗去土按根，茎，根茎等部进行分割，每段长10cm左右，按下列程序表面消毒：无菌水冲洗→95%酒精漂洗1min→6%的Naclo浸3min75%的乙醇漂洗0.5min→无菌水漂洗3次进行分割，每段长10cm左右同样处理的材料不做切割直接滚印于对照平板，并去最后一次漂洗的无菌水平板涂布，置相同条
