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时间:2018-09-05
《人iga-抗组织转谷氨酰胺酶抗体(iga-ttg)酶联免疫分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、人IgA-抗组织转谷氨酰胺酶抗体(IgA-tTG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E11907h特异性:本试剂盒可同时检测人IgA-tTG,且与其他抗体无交叉反应。有效期:6个月预期应用:ELISA法半定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中IgA-tTG含量。说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可
2、能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理用组织转谷氨酰胺酶包被酶标板,制成固相载体。向微孔中先加入待测样品进行反应,然后再加入辣根过氧化物酶标记抗人IgA-tTG抗体进行反应,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IgA-tTG呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品中IgA-tTG的效价(抗血清最终能显色的最高稀释倍数记为效价)。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(
3、Assayplate):一块(96孔)。2.样品稀释液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。3.辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体稀释液 (HRP-anti-humanIgADiluent):1×10ml/瓶。4.辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体(HRP-anti-humanIgA):1×120μl/瓶(1:100)。5.底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。6.浓洗涤液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。7.终止液(StopSoluti
4、on):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6.蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存1.血清:全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟,或将标本放
5、于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算抗体效价时,稀释了“N”倍,标本中抗体的效价为“N”。辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体稀释液稀释,
6、稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体加990μl辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样:分别设空白孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔加待测样品100μl,注意不要有气泡,
7、加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加辣根过氧化物酶标记抗人IgA抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,250μl/每孔,甩干。4.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见孔内有明显蓝色,即可终止)。5.依序每孔
8、加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。6.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。注:1.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。2.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
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