乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究.doc

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1、乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究作者：潘云华，周东霞，李嘉琦，陈元鼎【关键词】HBV;抗原表位;抗原性;FHV　　［摘要］目的：在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位，并对其诊断敏感性进行评价。方法：人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124147)的寡核苷酸序列，克隆入外源抗原表位表达载体系统FHVRNA2I3位点，构建重组质粒，在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和Westernblot检测表达产物的抗原性，并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblo

2、t检测58份乙肝患者血清抗HBs。结果：嵌和蛋白可与抗HBs特异性结合，其ELISA检测抗HBs阳性率为77.5%，Westernblot的为68%，而对照试剂盒的为62%。结论：在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性，有诊断应用价值。　　［关键词］HBV;抗原表位;抗原性;FHVRNA2载体系统　　StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitope　　Abstract：ObjectiveConstructionandExpressionHBVrecombinantepitopeina

3、foreignepitopepresentingvector，andevalutionofdignosticsensitivityforantiHBswithHBVepitope.MethodsOligonucleotidsencodedtwentyfouraminoacids(aaS124147)whichiswithin"a"antigenicdeterninantweresynthesizedandinsertedintoaforeignepitopepresentingcarrierI3site(FHVRNA2cDNAI3).HBVep

4、itopewasexpressedinaprokaryoticcellularsystem(BL21cell).TheexpressionproductwasanalyzedanditsantigenicitywasfurtherstudiedbyELISAandWsternblotmethodwithchimericproteinascoatingantigen.weusedchimericproteinascoatingantigentotestantiHBswithELISAandWsternblotin58seralsamples.Re

5、sultsThechimericproteinreactedwithantiHBsseralspecially.ThedetectionpositiveratioofantiHBsis77.5%and68%respectivelybyELISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantigen,thecontrol'swas62%.ConclusionHBVepitopeexpressedinaforeignepitopepresentingcarrierpossessedgoodantigenic

6、ityanddiagnosticvalue.　　Keywords：HBV；Epitope；Antigenicity；FHVRNA2carriersystem5　　乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体，并引起慢性肝炎和肝硬化，而且与肝癌的发生密切相关。迄今，对HBV感染最有力的预防和控制措施，仍是发展疫苗。FHVRNA2载体系统［1］是一个以昆虫小RNA病毒flockhousevirus外壳蛋白为载体的新型抗原表位表达载体，此系统中表达的载体蛋白可自动组装成病毒样颗粒，使插入的外源抗原表位可以暴露在颗粒的表面，保持天然构象和免疫学特性。本研究

7、拟将HBVa抗原表位插入到FHV外壳蛋白上，并对其抗原性及诊断意义进行了研究。　　1材料与方法　　1.1细胞重组质粒DNA大肠杆菌DH5α用于重组质粒pETEDNA的克隆和扩增。大肠杆菌BL21(DE3)用于重组质粒pETEDNA的表达。质粒DNA在含200μg/ml氨苄青霉素的LB或TB培育中生长，FHVRNA2载体系统即重组pETFHV构建见［1］。　　1.2HBV抗原表位及重组pETE的构建和表达　　1.2.1HBV抗原表位及重组pETE的构建人工合成HBV特异抗原表位E(氨基酸序列：124CTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNC

8、147)寡核苷酸序列：正向5’GATGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTA