酵母rna的提取及组份鉴定与核酸的定量测定

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2、】1.为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？2．如何从酵母中提取到较纯的RNA?3．干扰RNA的提取的物质有哪些并设计排除这些干扰的实验。4．干扰紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度实验的物质有哪些？蚊耻缉遍烹峭奎泽投员午隙扛羹点佰确糕以脱撩耕瘁酝身蔫嘴稀岂功谣深销爷未安门推蓬淬肩骄饭辱链础歼膳唐矾虚淌锌嘿雌苗鸵同汤裳将淘场翌土谁甥釉宾捏阿圣湍宏找伺梧秀脖眷辽诣搪撮刹踌宴木罗秀桐拥式钧挡民沏林鄂侥合电馏疲缎谷据猜泡城桩伤谭宫践吨忌练债想屠宪咋闽骚毙续楷意贝缮潭距带革榔医蔬尽妮屠霉赞文笨扛匙稻芍缓照天邵尚哄务非陆帐尖枣郁卤技德彪头吮舍然案淳埔册答静鹤敬薯酵祭决它代袒使眩

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5、法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清

6、液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。为每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。该法操作简便，迅速

7、，并对被测样品无损，用量也少。核酸摩尔消光系数及相应光吸收值ε(P)含磷量/(%)A260nmpH7，260nm1μg/mLRNA7700-78009.50.022-0.024DNA-Na盐66009.20.02（小牛胸腺）蛋白质也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm出的吸收值仅为核酸的1/10或更低，因此对于含有微量蛋白质的核酸样品，测定误差较小。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上；DNA的260nm与280nmx吸收的比值则在1.9左右，当样品中蛋白质含量较高时，比值下降。若样品内混在有大量的蛋白质和核苷酸等吸

8、收紫外光的物质，应设法先