60 Co照射对MGC-803细胞株癌基因表达的影响.doc

《60 Co照射对MGC-803细胞株癌基因表达的影响.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、60Co照射对MGC-803细胞株癌基因表达的影响【摘要】［目的］观察60Co照射对胃癌MGC-803细胞株癌基因表达的影响.［方法］利用常规方法复苏并培养MGC-803胃癌细胞株，利用60Co照射癌细胞株，在倒置显微镜下观察细胞形态学变化，利用免疫组织化学及原位杂交方法显示癌基因，观察间隙为6h.［结果］60Co照射前MGC-803胃癌细胞株c-fos，c-ha-ras基因表达稳定;照射6h后培养瓶内细胞被破坏或变形，且不表达癌基因，12～24h时部分癌细胞开始表达癌基因，48h时多数癌细胞表达癌基因.［结论］6

2、0Co照射在癌细胞内作用靶点是癌基因的DNA链，被照射后DNA易被破坏使肿瘤细胞的增生被抑制.【关键词】基因表达调控，肿瘤;癌基因;放射疗法放射治疗是重要的肿瘤治疗方法之一，现已成为独立的专门学科.目前认为肿瘤是基因病变引起癌基因激活和抑癌基因的异常表达导致细胞的异常增生而形成［1］.放射治疗利用各种射线破坏癌基因DNA结构，改变癌基因表达，破坏肿瘤细胞，以达到治疗目的.国内外已有关于放射治疗后肿瘤组织基因发生变化的研究报道［2，3］.本文探讨了60Co照射对MGC-803胃癌细胞株癌基因表达的影响.1材料与方法1

3、.1材料主要试剂:RPMI-1640培养基为LifeTech公司产品，C-fos抗体为Santacurz公司产品，p53，APC，c-ha-ras生物素标记由北京医科大学病理科提供;MGC-803胃癌细胞株由中国医科大学肿瘤研究所提供.1.2方法按常规复苏MGC-803胃癌细胞株，细胞贴壁生长，进入对数生长期时参照参考文献［4］方法照射60Co放射线，1次照射剂量为100Gy.继续培养，分别于照射后6，12，24，48h进行观察，并行涂片处理检测癌基因.免疫组织化学SP法:按常规操作，DAB显色，每组设阳性及阴性对

4、照，确定阳性率［5，6］.原位分子杂交:于42℃条件下用不含探针的杂交缓冲液孵育1，2h，滴加2mg/L含探针的杂交液，覆盖盖玻片，于95℃条件下共变性15min，随即进行反应，42℃过夜（12～16h），清除未结合探针，滴加碱性磷酸酶标记的链霉卵白素，BCIP/NBT显色，设阳性对照，确定阳性率［5，6］.2结果602Co放射线照射后6h时在倒置显微镜下观察可见，贴壁细胞全部漂浮，细胞被破坏或变形;12h时与6h时相仿，只在少数部位可见漂浮的圆形细胞;24h时可见较多的贴壁细胞;48h时所见与24h时相仿.照射6

5、h时癌基因检查未见癌基因表达;12h时在细胞内或细胞外可见少量c-fos，c-ha-ras基因表达;24h时表达较12h时增多;而在48h时则明显增多.为了遏制癌基因的表达，照射后12h时继续分2次给予2000Gy的60Co照射，间隔为5h，到24，48h时观察发现c-fos，c-ha-ras基因表达未增多，提示加大照射剂量或改变照射方法可阻碍癌基因DNA的表达，抑制癌细胞的增殖.　　3讨论本实验用免疫组织化学和原位杂交方法观察癌细胞结果示c-fos，c-ha-ras基因呈阳性表达，p53，APC基因呈阴性表达，提

6、示本组癌细胞株已被激活.本实验用突变型p53抗体进行了实验，发现p53基因未见表达，提示该癌细胞株p53以野生型形式存在，未发生突变，但处于关闭状态，不能起抑制癌细胞作用.本实验中胃癌细胞株经60Co照射后癌基因不表达，提示癌细胞已被损伤，12h后癌基因有新表达.受到1个治疗剂量的放射照射后，受损细胞并不立即全部死亡，而是有些细胞再进行几次不规则的分裂后才死亡.在一般的照射剂量下，有的细胞还能保存分裂能力，继续无限分裂，在此过程中若得不到适宜的环境和条件，则转化为不可逆的损伤，使细胞最终丧失分裂能力.本实验结果提示

7、，加大照射剂量或改变照射方法可阻碍癌细胞基因表达，提高肿瘤细胞的抑制增殖作用.【参考文献】［1］祝淑钗，万钧，周道安.恶性肿瘤基因治疗与放射治疗［J］.中华放射肿瘤学杂志，1999，8（4）:252.［2］杨怀安，朴哲孝治，高坂知节.Wp53和BcL-1综合表达与喉癌放射治疗［J］.中华放射肿瘤学杂志，2000，9（3）:191.［3］朝仓光司，志藤文明，坪田大，はか.喉头癌放射照射後再发病例のレ-ザ手术［J］.耳鼻临床，1996，89:1249.　　［4］殷蔚伯，谷铣之.肿瘤放射治疗学［M］.第3版.北京:中国协

8、和医科大学出版社，2002.270.［5］宋玉华，林永民，李牧，等.应用非放射性标记探针原位杂交研究人白血病细胞基因表达［J］.中华血液病杂志，1993，14（2）:74.［6］吴克复，宋玉华，郑国光，等.人白血病细胞系J6-1基因表达的调控［J］.中华血液病杂志，1993，14（2）:76.2