两种染色方法在细胞核DNA含量检测中的应用及比较.doc

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1、两种染色方法在细胞核DNA含量检测中的应用及比较作者：焦红丽，冶亚平夏潮涌【摘要】目的探讨改良、快速两种Feulgen染色方法达到最佳染色效果的水解时间段，为科研和临床的应用提供方法学指导。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织，制成肝细胞涂片，分别在室温和60℃温度下水解不同时间，应用改良和快速两种方法染色，TIGER图像分析仪检测和分析单个肝细胞核的DNA含量。结果（1）不同大鼠肝细胞涂片在同一水解温度、时间作用下，相同DNA倍体含量肝细胞的DNA含量大致相同，CV值均小于10%；（2）二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均接近2或4；

2、（3）同一大鼠相同水解温度不同水解时间，同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下，IOD(5～7min)>IOD(9～15min)>IOD(1min，20min)，室温水解温度下，IOD(50min)>IOD(20～30min，70～90min)>IOD(5～1min，100min)。结论HCL水解肝细胞涂片时间过长或过短均不能理想的染色，快速法和改良法Feulgen染色达较佳染色效果的时间段分别为：快速法5～7min，改良法20～90min。【关键词】DNA分析；染色与标记方法；Feulgen染色；肝细胞

3、涂片ApplicationandcomparisonoftwokindsofstainingmethodsforAbstract:ObjectiveTofindoutthesuitablehydrolysistimefortwostainingmethodsofFeulgenandtoprovideguidlineonresearchandclinic.MethodsSmearsoflivercellsuspensionwereobtainedfromfivehealthyrats.Allthehepatocytesare,respective

4、ly,hydrolyzedindifferenttimeatroomtemperatureand60℃,andthenstainedwithmodifiedFeulgenstainandquickone.DNAcontentandploidofintacthepatocytenucleiwasanalyzedbyTIGERcellimageanalysissystem.Results(1)thenuclearDNAcontentsarealmostidenticalfromsameDNAcontentploidyofdifferentratsu

5、nderthesametemperatureandtimeofhydrolysis,andtheCVofIODfromthreetypesofDNAcontentploidywaslessthan10percent.(2)TheIODratioamongdiploid,tetraploidandoctaploidwascloseto2and4.(3)TheDNAcontentsofhepatocytenucleifromsameDNAcontentploidyofdifferentratsweredistinctunderthesametemp

6、eratureanddifferenthydrolysistime:hydrolysisat60℃,IOD(5～7min)>IOD(9～15min)>IOD(1min，20min);hydrolysisatroomtemperature,IOD(50min)>IOD(20～30min，70～90min)>IOD(5～10min，100min).ConclusionnucleiDNAcantbestainedbetterforextralongorshorthydrolysistime,thebetterhydrolys

7、is5timeofquickFeulgenstainandmodifiedoneare,respectively,5～7minand20～90min.Keywords:DNAanalysis;stainingandlabelingmethods;feulgenstaining;smear细胞核的DNA含量测量与倍体分析对判断肿瘤的良恶性及预后有重要参考价值［1～4］。自1924年Feulgen和Rossenbeck［5］在组织原位上用Feulgen反应显示细胞核的DNA以来，Feulgen反应已广泛应用于生物医学、药学等学科中的细胞、组织化学染

8、色。几十年来，科研工作者们一直从多个角度探索Feulgen反应的最佳反应条件［6～9］，以更好地适应不同的应用要求。目前，临床和科研中普遍采用改良Fe