拟南芥PLT2互作蛋白_基因筛选和WOX5功能研究

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1、馨４灰碲迖士莩碩士学位论文私杰界ＰＬＴ２互作蛋会／基固歸政和Ｗ０Ｘ５功能祈念苏华英指导教师：张汉马教授专业名称：植物学研究方向：植物分子生物学二〇一八年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宂成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作／明确的说明。学位论文作者签名：签字曰期：洲Ｓ年扃

2、曰雜ｆ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解重庆师范大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权重庆师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。＊学位论文作者签名：签字日期：加沒年６月ｆＨ重庆师范大学硕士学位论文拟南芥PLT2互作蛋白/基因筛选和WOX5功能研究硕士研究生：苏华英指导教师：张汉马教授学科专业：植物学所在学院：生命科学学院重庆师范大学2018年

3、5月DissertationforMasterDegreeofChongqingNormalUniversityScreeningofPLT2InteractingProteins/GenesandFunctionalAnalysisofWOX5inArabidopsisCandidate:SuHuaYingSupervisor:ZhangHanmaProfessorMajor:BotanyCollege:CollegeofLifeScienceChongqingNormalUniversityMay,2018重庆师范大学硕士学位论文摘要拟南芥P

4、LT2互作蛋白/基因筛选和WOX5功能研究摘要植物干细胞是植物胚后发育形成各种组织器官的细胞来源和信号调控中心。拟南芥根尖干细胞受PLTs和WOX5等转录因子的调控。PLT2蛋白在QC和干细胞中大量积累，过量表达PLT2基因使根分生组织变长；WOX5基因在静止中心细胞特异性表达，在维持周围的干细胞的特性中起重要作用，WOX5过量表达可抑制柱干细胞的分化。为进一步了解植物根尖干细胞调控的分子机理，本研究主要通过酵母双杂交筛选PLT2相互作用蛋白以及对plt1plt2突变体进行EMS诱变，筛选短根恢复突变体，并进一步探究了WOX5基因过量表达对拟南芥

5、生长发育的影响。主要研究结果如下：1、构建pGBKT7-PLT2诱饵表达载体，利用营养缺陷型培养基筛选cDNA文库，共筛选出6个与PLT2相互作用的蛋白，采用酵母双杂交和BIFC技术验证了其中两个蛋白(HSP20和DJA6)与PLT2之间的相互作用，表达分析发现HSP20和DJA6在根尖和茎尖分生组织中表达，暗示HSP20和DJA6有可能参与根尖和茎尖干细胞调控。2、从EMS诱变的plt1plt2突变体库中筛选到了能部分恢复plt1plt2根生长缺陷的突变体，初步表型分析发现它们的根尖分生组织均比plt1plt2双突变体的根尖分生组织长，表明突变

6、基因的正常功能可增强plt1plt2的表型。3、成功构建了WOX5过量表达载体，对转基因株系幼苗分析发现除已报道过的QC和柱干细胞异常分裂表型外，还出现主茎短小甚至不能抽薹，莲座叶正面长出营养芽，花序分生组织表面出现异位花芽，花芽在茎表面随机产生并密集成簇，没有明显的发育先后顺序，植株侧枝减少，果荚短小并向中间皱缩和弯曲，果荚柄上具有丝状结构等未曾报道过的新表型，说明WOX5过量表达对植株的茎、叶以及花等组织器官的发育也有调控作用。本研究为进一步研究PLT2和WOX5在根尖干细胞调控，以及WOX5在其它器官发育中的作用及其机理提供了新的数据与研究

7、材料，对进一步深入研究植物生长发育的调控机制具有重要意义。关键词：干细胞，PLT2，WOX5，蛋白相互作用I重庆师范大学硕士学位论文ABSTRACTScreeningofPLT2InteractingProteins/GenesandFunctionalAnalysisofWOX5inArabidopsisABSTRACTStemcellsarethesourceofnewcellsandsignallingregulatorycentersforpost-embryonicdevelopmentofneworgansinplants.Stemc

8、ellsintherootapicalmeristemsareregulatedbytranscriptionfactorssuchas